56门脉高压患者中,9例未出现胃病,另外47例有不同程度的胃黏膜病变,PHG评分为1,2,3分分别有26,15和6例；2.免疫组化,Western blot显示Hsp70在PHG胃黏膜表达水平下降,在重度PHG患者中下降水平显著,P
目的建立肾癌细胞OS-RC-2骨转移动物模型，获得病灶肿瘤细胞株，并对两组细胞间的基因表达谱进行对比分析，筛选差异表达基因。 方法通过胫骨平台向胫骨髓腔内注射OS-RC-2细胞，待局部成瘤后取病灶肿瘤细胞，循环注射，最后获得的肿瘤细胞株与OS-RC-2细胞之间分别以MTT法检测增殖能力，Transwell法检测侵袭能力，流式细胞技术检测细胞周期变化。提取两组细胞的mRNA，通过基因芯片技术进行杂交扫描和分析，结合KEGG网站数据库的信号通路分析，筛选出相关基因，并以RT-PCR及Western 点击此处 blot法分别验证筛选出的基因在mRNA及蛋白水平上的表达差异。 结果建立肾癌骨转移动物模型，获得高骨转移能力细胞株OS-RC-2-BM-3，基因芯片扫描得到差异基因共1196个，其中上调基因926个，下调基因270个，根据KEGG数据库筛选出HIF-1α及HSP90，RT-PCR结果及Western结果均与基因芯片扫描符合。 结论肾癌细胞OS-RC-2骨转移与多个基因相关，其中HIF-1α及HSP90可能起到关键作用。
实验目的： Epipolythiodioxopiperazines (ETPs)类化合物是从真菌中提取出来的一种次生代谢产物,近年来发现这类化合物很多具有抗肿瘤作用。军事医学科学院车永胜课题组以Verticilin为母核,对其进行结构改造,合成得到新的具有抗肿瘤活性的衍生物G226。本课题对G226体内外抗肿瘤作用进行系统评价,并探索其抗肿瘤作用靶点和分子机制。

方法与结果： 第一部分G226体内外抗肿瘤作用评价 采用磺酰罗丹明B蛋白染色法和CCK-8测定G226体外细胞毒实验,结果显示,(G226对包括白血病、肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、结肠癌和膀胱癌等在内的肿瘤细胞具有较强的增值抑制作用,没有明显的系统选择性,平均ICso为86.6nmol/L,抗肿瘤活性强于阿霉素(adriamycin,ADR, IC50=230.3nmol/L)。我们选用人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠皮下移植瘤模型评价该化合物体内抗肿瘤作用,结果显示0.5mg/kgG226,每三天给药1次,能显著抑制移植瘤的生长,第21天时抑瘤率达到60.82%。 第二部分G226抗肿瘤作用机制研究 第一节G226诱导肿瘤细胞自噬和凋亡的发生及其相关机制 {Selleck Anti-cancer Compound Library|Selleck Anticancer Compound Library|Selleck Anti-cancer Compound Library|Selleck Anticancer Compound Library|selleck Anti-cancer Compound Library|selleck Anticancer Compound Library|selleck Anti-cancer Compound Library|selleck Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|buy Anti-cancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library半抑制浓度|Anti-cancer Compound Library价格|Anti-cancer Compound Library花费|Anti-cancer Compound Library溶解度|Anti-cancer Compound Library购买|Anti-cancer Compound Library制造商|Anti-cancer Compound Library查找购买|Anti-cancer Compound Library订单|Anti-cancer Compound Library mouse|Anti-cancer Compound Library chemical structure|Anti-cancer Compound Library分子量|Anti-cancer Compound Library molecular weight|Anti-cancer Compound Library数据表|Anti-cancer Compound Library supplier|Anti-cancer Compound Library体外|Anti-cancer Compound Library细胞系|Anti-cancer Compound Library concentration|Anti-cancer Compound Library nmr|Anti-cancer Compound Library体内|Anti-cancer Compound Library clinical trial|Anti-cancer Compound Library cell assay|Anti-cancer Compound Library screening|Anti-cancer Compound Library high throughput|buy Anticancer Compound Library|Anticancer Compound Library半抑制浓度|Anticancer Compound Library价格|Anticancer Compound Library花费|Anticancer Compound Library溶解度|Anticancer Compound Library购买|Anticancer Compound Library制造商|Anticancer Compound Library查找购买|Anticancer Compound Library订单|Anticancer Compound Library chemical structure|Anticancer Compound Library数据表|Anticancer Compound Library supplier|Anticancer Compound Library体外|Anticancer Compound Library细胞系|Anticancer Compound Library concentration|Anticancer Compound Library clinical trial|Anticancer Compound Library cell assay|Anticancer Compound Library screening|Anticancer Compound Library high throughput|Anti-cancer Compound high throughput screening| 根据第一部分结果,选用G226较敏感细胞株MDA-MB-231和MCF-7探究G226诱导自噬与凋亡的能力。流式细胞术结合Western Blot发现G226能够剂量依赖和时间依赖地诱导肿瘤细胞发生凋亡,并且这种凋亡能够被Caspase抑制剂所逆转。G226诱导的细胞凋亡主要通过死亡受体通路,G226能够激活Caspase-8,以及下游Caspase-3/7和Caspase-9,引起Bid切割,导致线粒体膜电位改变,诱导肿瘤细胞发生凋亡。但该化合物对线粒体通路重要调节蛋白Bax, Nutlin-3体内 Bcl-2和Bcl-xl的表达则无影响。免疫荧光结合Western Blot技术进一步发现G226同样也能诱导肿瘤细胞发生自噬,并且自噬抑制剂3-MA和溶酶体抑制剂CQ在阻断自噬发生的同时,能够逆转G226诱导的凋亡。为了探究自噬与凋亡的关系,我们采用免疫荧光技术荧光共定位发现G226能够诱导Caspase-8与p62和LC3相互作用形成复合体。利用siRNA技术分别沉默LC3和p62,发现均能一定程度逆转G226诱导的Caspase-8和Caspase-3/7的切割与激活,同时沉默LC3也能部分逆转细胞凋亡的发生,表明LC3和p62是G226诱导Caspase的激活和细胞凋亡所必需的。但是沉默p62并不能阻滞G226诱导肿瘤细胞凋亡的发生。

第二节G226抗肿瘤作用不完全依赖于其对TopoⅡ的抑制。 采用DNA拓扑异构酶介导的supercoiled pBR322DNA解旋反应和kDNA去连环反应证实G226能够特异性抑制Topo Ⅱ的活性,且分子水平上G226靶向抑制Topo Ⅱ的作用强于阳性药依托泊甙(etoposide, VP16)。同时,中性单细胞凝胶电泳实验、Western Blot技术和流式细胞术发现G22还能够诱导DNA损伤、细胞凋亡和细胞G1期阻滞。随后我们采用Topo Ⅱα亚基低表达、Topo Ⅱβ亚基缺失的HL-60/MX2和HL-60细胞模型,比较分析G226对两株细胞的作用差异。在相同条件下,G226在两株细胞株中均能诱导DNA双链断裂、诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖,且作用强度类似。在增殖抑制试验中,G226对HL-60/MX2的耐药因子(RF)仅为3.5,同样条件下Topo Ⅱ毒剂VP16和ADR则发生明显耐药,耐药因子分别为86.9和26.4,而Topo Ⅰ抑制剂CPT和SN38耐药因子分别为1.6和1。以上结果表明G226诱导的DNA损伤、细胞凋亡及死亡并不完全依赖于其对TopoⅡ的抑制。 第三节G226影响多个Hsp90客户蛋白表达 Western Blot检测细胞周期调控相关蛋白变化,结果显示,G226引起细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4和CDK6以及DNA损伤修复通路Chkl蛋白的表达显著下调,使细胞不同通过G1期检测点和损伤修复,这可能是G226引起细胞G1期阻滞的原因。CDK4、CDK6和Chkl均为Hsp90的客户蛋白,此外G226作用后还可下调Akt,Raf、Her2、Met以及EGFR等多个Hsp90的客户蛋白,与Hsp90抑制剂AUY922作用相应细胞的结果相一致。此外,G226还能和大多数Hsp90抑制剂一样,在导致其客户蛋白减少的同时,也会导致热休克蛋白Hsp70反馈性上升。这些结果强烈提示G226可能靶向抑制Hsp90。但在用荧光偏振试验探究G226是否能在分子水平与Hsp90结合抑制其活性时,发现10μmol/LG226作用后抑制率仅为23.