利用CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果沉默1组和沉默2组CD99蛋白和mRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.05),而沉默2组又明显低于沉默1组(P<0.01);因此,选用CD99 siRNA-2#进行后续实验。沉默CD99基因表达后3、4、5 d,沉默2组细胞增殖水平较对照组明显降低(P<0.05或者);平板克隆形成实验结果显示,沉默2组细胞克隆集落数明显减少(P<0.05)。沉默2组G0/G1期细胞百分比较对照组明显增加(P<0.05),S期细胞、G2/M期细胞百分比明显低于对照组(P<0.05)。沉默2组细胞早期凋亡率(8.75%±1.47%)显著高于对照组(3.42%±1.21%;P<0.05)。结论 CD99基因在髓母细胞瘤DAO很少Y细胞的增殖和凋亡中发挥重要作用,推测CD99基因可能成为治疗髓母细胞瘤的一个新靶点。
目的探讨肌动蛋白结合蛋白ANLN在体外对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株、胃黏膜细胞株中ANLN的表达情况和验证siRNA对ANLN基因的敲减情况。划痕实验和Transwell检购买抑制剂测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。CCK-8实验、细胞荧光染色和流式细胞术检测沉默ANLN基因表达对胃癌细胞增殖和凋亡的变化。结果胃癌细胞株SGC-7901/MGC-803中的ANLN的mRNA和蛋白表达显著高于正常胃黏膜细胞株GES-1(P<0.001)。siRNA干扰后RT-PCR和Western blot结果证明转染成功,转染组的m RNA和蛋白表达量与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。