借助于RNA免疫共沉淀高通量测序并结合核糖体蛋白RPS6抗体,对癌细胞系中与核糖体结合的mRNAs分子和lncRNAs分子进行分析

借助于RNA免疫共沉淀高通量测序并结合核糖体蛋白RPS6抗体,对癌细胞系中与核糖体结合的mRNAs分子和lncRNAs分子进行分析,并结合GO分析和KEGG分析对上述分子进行说明。利用ORF finder与CPC软件对相关分子的编码潜能进行分析,并进一步利用qPCR检测了目标分子的表达情况。2.检测目标lncRNA分子LINC00998编码翻译产生的此网站多肽分子并分析其相关特性和在肝癌组织中的表达差异。通过RACE鉴定目标分子的确切序列,采用FISH方法检测目标分子的亚细胞定位。设计相关质粒、制作相应抗体并结合多种在线工具诸如ClustalX、TMHMM、ProtScale和Signal IP 4.0,对LINC00998的编码产物及其结构性能进行深入的验证分析。3.目标lSelleckchem IACS-10759ncRNA分子LINC00998及其翻译产生的多肽分子SMIM30的分子功能分析及动物模型验证。通过特异的shRNA序列下调了肝癌细胞中LINC00998/SMIM30分子的表达,并结合CCK8、EdU、Transwell、细胞周期和细胞划痕等一系列细胞功能学实验,体外检测LINC00998/SMIM30的分子功能。利用功能BB-94浓度拯救实验,确定发挥功能的主体。建立小鼠皮下荷瘤模型及肝脏移植瘤模型,体内检测SMIM30多肽分子的功能。4.Co-IP结合质谱分析鉴定多肽分子SMIM30结合的蛋白分子及相关结合的结构域。采用Co-IP并结合质谱分析鉴定与多肽分子SMIM30结合的功能蛋白分子及相关结构域。并利用免疫荧光双标方法对多肽分子SMIM30及其结合的蛋白分子进行共定位。5.多肽分子SMIM30促进肝癌发生发展的分子机制探讨。

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