1%戊巴比妥钠腹腔麻醉,迅速断头处死,在低温修块台上分离出双侧海马组织,置于Eppendorf管中,-80℃保存。 4.大鼠海马CA1神经元病理形态学观察 HE染色,光镜下观察海马CA1区神经元形态改变。 5.谷氨酸受体免疫组化染色 按照说明书的操作顺序进行SP法免疫组化染色,镜下观察各组海马CA1区NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1的阳性神经元数目(面密度Sv值对二者的变化进行定量)。 6. Western-Blot检测海马组织谷氨酸受体蛋白的表达水平

称取海马组织,提取总蛋白,BCA法进行蛋白浓度定量。应用Western-Blot方法检测各组大鼠海马组织NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1的蛋白表达水平。 7.实时荧光定量PCR检测海马组织谷氨酸受体mRNA的表达水平 冰上迅速分离大鼠海马,Trizol提取海马总RNA,逆转录cDNA,采用PrimerScriptTM实时荧光定量PCR试剂盒一步法检测各组海马组织中NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1 mRNA的表达水平。 结果 1.水迷宫试验 (1)术前各组大鼠平均逃避潜伏期和跨越平台次数组间差异无显著性(P>0.05);(2)术后第25d～30d,与假手术组比较,VD模型组平均逃避潜伏期明显延长和跨越平台次数显著减少(P0.05)。以上结果提示VD模型大鼠的学习和记忆成绩降低,补阳还五汤可以提高其学习和记忆成绩。 2.光镜下观察大鼠海马CA1区神经元病理学特征 (1)假手术组大鼠海马CA1区锥体细胞核大而圆,核仁明显,细胞排列致密整齐;(2)相比之下,VD模型组大鼠海马CA1区锥体细胞松散,层次不清,有细胞缺失现象,炎性细胞浸润,部分细胞旁有空染区,核固缩、胞质浓染、胞体变小,并且有胶质细胞增生形成结节;(3)补阳还五汤治疗组和尼莫地平组大鼠海马CA1区锥体细胞排列尚整齐,未发现炎性细胞浸润,核固缩现象较少见。

而且 3.谷氨酸受体免疫组化染色 (1)与假手术组海马CA1区NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1阳性神经元面密度值比较,VD模型组明显减少(P<0.05);(2)与VD模型组比较,补阳还五汤治疗组和尼莫地平组大鼠海马CA1区NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1阳性神经元面密度值明显增多(P0.05)。此结果提示VD大鼠海马CA1区NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1水平降低参与了VD的发病机制,补阳还五汤可以促进VD大鼠海马CA1区NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1的表达水平而提高其学习和记忆成绩。 4. Western-Blot检测海马组织谷氨酸受体蛋白的表达水平 SGC-CBP30分子量 (1)与假手术组大鼠海马组织NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1蛋白表达水平比较,VD模型组受体蛋白表达水平显著降低(P<0.05);(2)与VD模型组比较,补阳还五汤治疗组和尼莫地平组大鼠海马组织NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1蛋白表达水平显著升高(P0.05)。此可以提示VD大鼠海马组织NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1蛋白表达水平的降低参与了VD的发病机制,补阳还五汤可以促进VD大鼠海马神经元NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1蛋白的表达水平而提高其学习和记忆成绩。 5.实时荧光定量PCR检测海马组织谷氨酸受体mRNA的表达水平 (1)与假手术组NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1目的基因表达量比较,VD模型组受体目的基因表达量明显降低(P<0.05);(2)与VD模型组比较,补阳还五汤治疗组和尼莫地平组NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1目的基因表达量明显升高(P0.05);(4)各组单位看家基因(β-actin)中NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1的表达量也存在相同差异。此可以提示VD大鼠海马组织NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1

selleck化学药品液面控制 mRNA表达水平的降低参与了VD的发病机制,补阳还五汤可以促进VD大鼠海马神经元NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1 mRNA的表达水平而提高其学习和记忆成绩。 结论 1.本实验建立的VD大鼠模型可模拟人类VD以学习和记忆能力缺损为主的认知功能障碍,是研究VD比较理想的动物模型,对深入研究VD是可行的。VD模型大鼠海马CA1区出现病理性变化。 2. VD大鼠海马NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B蛋白及mRNA表达水平降低,与其学习和记忆成绩下降相一致。提示NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B表达水平降低可能参与了VD的发病。 3. VD大鼠海马AMPA-GluR1蛋白及mRNA表达水平降低,与其学习和记忆成绩下降相一致。提示AMPA-GluR1表达水平降低可能参与了VD的发病。 4.补阳还五汤通过上调VD大鼠海马组织NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、AMPA-GluR1蛋白及其mRNA表达水平,改善海马组织CA1病理变化,减轻脑缺血再灌注对海马神经元的损伤,从而发挥对VD的治疗作用,提高VD大鼠的学习和记忆能力。提示该药可能具有改善VD的药理学作用。
目的 观察姜黄素治疗实验性肝纤维化大鼠的作用效果,并探讨其抗肝纤维化的作用机制。 方法 以四氯化碳腹腔注射方法制作大鼠肝纤维化模型,姜黄素为阳性对照,生理盐水注射组为正常对照组。检测血清ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ和CⅣ的表达水平;肝组织行HE染色,并进行评分;免疫组化染色观察肝组织I、Ⅲ型胶原、TGF-β1、P38MAPK及P-P38MAPK变化。 结果 较之模型组,姜黄素可明显降低实验性肝纤维化大鼠血清的ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ和CⅣ的表达水平(P<0.05),明显改善肝脏的病理学情况,肝纤维化评分明显降低(P<0.