挑选人类正常胃粘膜上皮细胞株GES-1以及六个胃癌细胞株(AGS、SGC7901、 MKN45、MKN28、BGC823、NCI-N87)。使用实时定量RT-PCR检测不同细胞株中PUMA mRNA的表达水平。 2.用Western Blotting方法检测上述七种细胞株中PUMA蛋白表达水平。 3.收集24例胃癌组织标本,使用实时定量RT-PCR检测胃癌组织与癌旁正常组织中PUMA mRNA表达水平。 4.通过搜索www.oncomine.org数据库,应用Mann-Whitney test、Logrank test、 Cox’s regression model等统计学方法分析PLMA基因与胃癌临床特征的关联性。 5.应用携带有PUMA基因的质粒转染MKN28和SGC7901这两种胃癌细胞株,然后通过MTS法及流式细胞术分析PUMA基因表达增加对胃癌细胞增殖能力及凋亡的影响 6.应用SiRNA敲减GES-1胃癌细胞中PUMA基因的表达,并通过MTS法检测分析PUMA基因表达减少对胃癌细胞增殖能力的影响。 结果： 1.与正常胃粘膜上皮细胞株相比,在大多数胃癌细胞株中,PUMA基因无论在mRNA还是在蛋白质水平均表现为明显的表达下调；此外,与癌旁正常组织相比,胃癌组织中PUMA mRNA表达水平也表现为显著下降(P
长期以来,我国的创新药物研发事业远远落后于世界领先水平,由于绝大多数重大疾病的药物专利权都握在欧美公司的手中,不仅广大同胞的病痛难以得到及时有效的治疗,我们还不得不面对以巨大的药物消费市场来换取微薄利润的尴尬局面。因此,研发具有自主知识产权的创新药物势在必行。然而,创新药物研发项目具有投资巨大、技术门槛高、周期长、风险很高的特点。这一行业在我国才刚刚起步,面临着融资困难、经验不足、产业化缓慢和专业人才匮乏等困难,还没有形成自身成功的管理体系。

本文正是想通过创新药物研发企业的国际比较,总结发达国家能够成功创制新药的一些关键因素,找出我们落后的原因所在,分析在国内现有经济环境下,这类项目能够取得成功的管理方法。文章分别从核心技术平台的搭建、项目组合管理战略、具体项目运作三个不同层面,逐层进行分析论证,建设性的提出一套可行的项目管理方法。在技术战略层面,搭建产学研一体化完整整合的核心技术平台是关键：包括平台搭建的关键影响因素,组织模块构建,以及各模块如何有效的整合运作。在企业战略层面,根据研发管线,短期项目、中期项目、长期项目相结合的项目组合管理是关键：即短期获得生存与发展的项目战略,中期持续增长的项目战略,长期高额利润的项目战略。在项目运作层面,将项目管理的工具方法合理有效的运用是关键：包括项目的选题立项、筹备启动、组织管理、进度控制、风险管理、结题验收等。

还有 查找更多 随着国家“十二五”重大新药创制项目的不断推进以及一系列鼓励创新政策的出台,创新药物研发事业在我国正是方兴未艾,在未来十年必将迅速发展并取得突破性进展。在这一国内新兴领域的早期开发探索阶段,总结论证出一些在当下国内的经济环境下,创新药物研发项目能够获得成功的管理方法,给行业中的其它企业带来一些借鉴和帮助,推动这一行业的发展,正是本文的核心价值所在。
背景和目的 中药藤黄取自藤黄科植物藤黄树分泌的干燥树脂,性寒,味酸、辛、涩,主治痈疽肿毒,顽癣恶疮。藤黄酸(gambogic acid,GA)是中药藤黄主要的抗肿瘤活性成份,现代中药学研究证实其具有广谱抗肿瘤活性,有效抑制包括肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌等肿瘤细胞的生长。GA通过促进肿瘤细胞凋亡、抑制端粒酶活性、诱导细胞G2/M期阻滞、抑制核膜孔蛋白表达、抑制血管生成、激活T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞等途径发挥抗肿瘤活性,但GA抑制p53野生型非小细胞肺癌细胞增殖的分子机制尚未完全阐明。 本研究以p53野生型非小细胞肺癌细胞株A549为研究模型,观察GA对细胞生长的抑制作用,分析GA干预对非小细胞肺癌细胞ROS含量、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△ψm)、细胞凋亡率的影响,检测p53及其下游促凋亡靶基因Bax、Bik和PUMA表达的变化情况,探讨GA诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的分子机制。进一步应用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,

NAc)预处理A549细胞,分析清除内源性ROS对GA诱导A549细胞凋亡、表达p53及凋亡相关蛋白的影响；深入研究ROS在GA调控p53表达诱导A549细胞凋亡中的作用。 许多 实验方法 体外培养p53野生型非小细胞肺癌A549细胞,MTT法观察不同浓度GA干预细胞24、48和72h对其增殖的影响；Annexin V-FITC/PI双染法分析GA干预A549细胞24h凋亡率的变化；DFCH-DA法分析GA干预A549细胞2h胞内ROS的含量；JC-1探针染色分析GA干预16h后A549细胞线粒体膜电位的变化；Westernblot实验分析GA干预对A549细胞表达p53及其下游靶基因Bax、Bik和PUMA的影响,及抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase级联反应蛋白表达的变化。 我们进一步应用抗氧化剂NAc预处理2h清除内源性ROS,分析GA对A549细胞凋亡率、p53及凋亡相关蛋白表达的影响。 结果 GA呈剂量-时间依赖关系抑制A549细胞的增殖,不同浓度(0.5、1、2.5、5和10μM)GA干预24h,存活率分别为98.3%±4.8%、92.7%±4.0%、73.1%±5.2%、42.6%±3.7%和21.5%±3.8%；干预48h,存活率分别为96.2%±5.4%、84.5%±4.6%、62.6%±4.8%、21.8%±5.0%和12.7%±3.6%；干预72h,存活率分别为95.4%±6.1%、80.2%±5.7%、43.5%±4.3%、18.6%±4.8%和10.3%±2.9%。Annexin V-FITC/PI双染结果显示,2.5、5和10μMGA干预A549细胞24h的凋亡率分别为22.4%±5.7%、40.0%±6.2%和66.6%±5.