采用免疫组化方法检测72例胃癌患者的胃癌及其癌旁组织中htert、gli1、gli2的表达;2.根据72例胃癌标本中htert和gli1、gli2表达,分别统计分析htert和gli1、htert与gli2之间的关系;3.根据72例胃癌标本中htert和gli1、gli2表达,分别统计分析三者与胃癌患者临床病理之间的关系;4.根据72例胃癌标本中htert和gli1、gli2表达,分别统计分析三者与胃癌患者预后之间的关系。第二部分:htert促进胃癌gli1表达的分子机制研究1.采用western-blot检测7株胃癌细胞中htert、gli1的基础表达;2.采用实时荧光pcr检测bgc-823、sgc-7901转染htert24小时后gli1mrna的表达情况;3.采用western-blot检测bgc-823、sgc-7901转染htert24小时后gli1蛋白表达情况。【研究结果】第一部分:胃癌组织中人端粒酶逆转录酶与gli1、gli2表达相关性的研究1.免疫组化结果表明,htert、gli1、gli2三者在胃癌组织中的表达较癌旁组织均明显升高(p<0.01);3.72例胃癌htert、gli1、gli2高表达均与淋巴结转移密切相关(p<0.05),且gli1高表达还与胃癌患者远处转移有关(p<0.05、p<0.05),三者均高表达组预后最差(p
刺猬通路是一条重要的胚胎通路。在胚胎时期,它能够促进细胞的增殖、分化,如果被阻断会导致畸形的发生;在成年时期,刺猬通路参与组织的修复,一般处于静默状态,如果被异常活化会引发癌症,比如:髓母细胞瘤和基底细胞癌。SMO蛋白是这条通路中一个关键的组成部分,抑制SMO蛋白能够阻断刺猬通路,这会成为抗肿瘤的一种新途径。目前针对刺猬信号通路已经发表了很多小分子抑制剂,其中小分子SMO蛋白抑制剂Vismodegib(GDC-0449,用于治疗晚期的基底细胞癌)的成功上市,标志着刺猬信号通路抑制剂用于抗肿瘤的可行性。然而,Vismodegib的理化性质差,且已经出现耐药性,这就表明科学家们仍然需要研究新型的分子骨架以改善理化性质和对抗已出现的耐药性。Vismodegib理化性质差的主要原因是分子骨架中的碳原子都是sp2杂化,这就使得整个分子比较平,因而它的溶解度低、熔点高。为解决这个问题,我们引入了sp3杂化的碳原子,合成了一系列胺基噻唑-吡啶杂环类化合物作为新型的刺猬通路拮抗剂,这些化合物的活性接近或优于Vismodegib,而且化合物的熔点更低、溶解度更好。化合物11和30在老鼠体内具有良好的药物代谢动力学性质,且生物利用度都比较好,分别是34%和77%,说明这类新型化合物可用于进一步的药效学研究。在这类新型化合物中,有些分子表现出化学不稳定性,因此我们又在原来分子骨架的基础上增加了一些小分子基团来消除潜在的代谢位点,以得到更稳定的化合物。化合物的合成及后续的细胞生物实验正在进行中。
刺猬通路在胚胎成长阶段,对胚胎的生长分化起到重要作用;而在成人中它的作用局限于组织维持和修复。它的异常激活与多种肿瘤的发生有关,开发刺猬通路的抑制剂成为治疗肿瘤的一个途径。刺猬通路主要由Hedgehog(Hh)配体、Patched(Ptch)、Smoothened(Smo)蛋白和Gli转录因子等组成。现在研究最多的是Smoothened蛋白抑制剂。此类抑制剂已有多个进入临床的化合物。已经批准上市的药是GDC-0449,但它溶解度低、有较强的副作用且已经产生了耐药性。我们对比分析了近几年的临床化合物和已经上市的药物,依据药物设计原理设计出具有哌嗪并咪唑类结构的新型化合物,希望能够提高药物物理化学性质,并保持其抗癌活性。由2-氨基吡嗪开始,经过一系列步骤合成出尾部具有酯、酰胺、胺及反转酰胺的片段,与2,,5,-二氯-3,5-二甲基-2,4,-联吡啶片段连接成最终化合物。对合成出的29个化合物的构效关系进行了探讨,优选出了活性最好的化合物(IC50=0.087μM)。这为我们进一步优化构效关系奠定了基础。
本论文的工作分为以下两个部分：第一部分重组人精氨酸酶(rhArg)对非何杰金淋巴瘤的细胞毒性及细胞自噬在rhArg杀伤非何杰金淋巴瘤细胞中的作用研究近年来,靶向细胞代谢尤其是精氨酸代谢治疗肿瘤受到了大量关注。精氨酸酶是一种精氨酸降解酶,对多种恶性实体瘤均有杀伤效果。本课首次研究了rhArg对非何杰金淋巴瘤(NHL)细胞的细胞毒性。细胞自噬真核细胞内遗传保守的蛋白质降解途径,在维持细胞内环境稳态及细胞增殖、分化和死亡等过程中起重要作用,与肿瘤治疗息息相关。研究表明生长因子、氨基酸缺乏等外界刺激会诱导细胞自噬。但精氨酸酶能否诱导NHL细胞自噬尚未见报道,本课题首次研究了rhArg诱导NHL细胞自噬以及细胞自噬在rhArg杀伤NHL细胞中的作用和机制。选择NHL研究中最常用的细胞株Raji和Daudi作为体外模型。细胞经rhArg处理后,用MTT法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位；用电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体、western

点击此处 selleck化学药品 因为 blot检测细胞自噬相关蛋白或细胞凋亡相关蛋白的表达。用siRNA沉默细胞凋亡调控基因caspase3、细胞自噬调控基因ATG5和Beclin1。rhArg处理细胞后,用自噬抑制剂3-methyladenine (3-MA) 和 chloroquine (CQ)抑制细胞自噬。本研究结果表明：0.