20±1.59，G~-菌败血症组为6.78±1.79，高于G~+菌败血症组5.39±0.78，(t=2.29，P=0.037)，在新生儿细菌性肺炎组、细菌性脑膜炎组和尿路感染组也明显增高。单核细胞TLR4蛋白表达在各感染组与非感染组之间差异无统计学意义，感染组TLR4阳性细胞百分比为(0.71±0.31)％，高于非感染组(0.29±0.36)％。中性粒细胞TLR4蛋白表达在败血症组最高，为3.25±1.25，在G~+菌败血症表达为2.97±1.48，G~-菌败血症为3.75±1.01，两者比较P＜0.05，肺炎组、脑膜炎组和尿路感染组比非感染组明显增高。感染组TLR4阳性细胞百分比与非感染组比较差异无统计学意义。 6．MD-2 mRNA在新生儿败血症组表达最高，G~+菌败血症组表达为5.43±1.19，G~-菌败血症组表达为5.76±1.17，两者比较差异无统计学意义(t=0.594，P=0.56)，细菌性脑膜炎组、尿路感染组MD-2 mRNA显著增高。MyD88 mRNA在新生儿败血症组表达最高5.71±0.94，MyD88 mRNA在G~+菌败血症组表达为5.92±1.01，在G~-菌败血症组表达为5.79±0.85，两者比较差异无统计学意义(t=0.793，P=0.86)，MyD88
mRNA在新生儿各感染组均显著增高。在败血症组，TLR2 mRNA与MD-2 mRNA相关系数为0.415，P=0.011；在肺炎组的相关系数为0.38，P=0.04。新生儿感染组TLR4 mRNA与MD-2 mRNA成正相关(R=0.39，P=0)，败血症组，TLR4 mRNA与MD-2mRNA相关系数为0.442，P=0.021：脑膜炎组TLR4 哪里 mRNA与MD-2 mRNA相关系数为0.913，P=0.004；尿路感染组相关系数为0.21，P=0.045。TLR2 CB-839核磁共振 mRNA与MyD88 mRNA相关性显著(R=0.956，P=0.00)。TLR4 mRNA与MyD88 mRNA相关性显著(R=0.997，P=0.00)。TLR3 mRNA与MD-2和MyD88 mRNA均无明显相关性。 7．G~+菌败血症组TLR2 mRNA(6.43±0.74)表达显著高于TLR4
mRNA(5.39±0.78)(t=1.56，P=0.024)，G~-菌败血症组TLR4 mRNA(6.78±0.79)表达显著高于TLR2 mRNA(5.64±0.68) (t=2.63，P=0.011)。败血症组单核细胞TLR2蛋白表达显著高于TLR4表达，有统计学意义(t=1.06，P=0.044)。TLR4阳性细胞百分比均显著低于TLR2阳性细胞百分比，P＜0.01。各感染组中性粒细胞表面TLR4蛋白表达水平高于TLR2，P＜0.05；各感染组与非感染组之间比较，TLR4阳性细胞百分比均显著低于TLR2阳性细胞百分比，P＜0.01。 8．败血症组CD64表达为7845.25±1790.07 M／U，显著高于局部感染组4003.86±1790.07 M／U(P=0.00)；通过绘制ROC曲线确定CD64阳性标准为≥3000 M／U。新生儿败血症组，CD64检测阳性率为91％，灵敏度为92％，明显高于血培养及CRP。败血症组和其他感染组TLR2和TLR4蛋白表达与CD64相关性分析，在败血症组TLR2和TLR4与CD64有显著相关性，通过TLR2和TLR4可区分G~+和G~-菌感染，但CD64不能。
结论新生儿感染时不同免疫细胞TLR2 mRNA／蛋白和TLR4 mRNA／蛋白表达显著增高，特别是在严重感染败血症组。TLR2主要在G~+菌感染增高，TLR4主要在G~-菌感染增高。TLR2和4表达与MD-2和MyD88有相关性，提示TLR2和TLR4及信号传导途径均参与新生儿抗感染免疫机制。新生儿感染时中性粒细胞CD64表达明显增高，可望成为诊断新生感染的指标，中性粒细胞表面TLR与CD64有显著相关性。这些结果为进一步深入了解新生儿抗感染免疫机制提供新思路和实验基础。
研究目的：本课题将从临床观察持续性非卧床腹膜透析(CAPD)患者腹膜透析液内皮素-1(endothelin—1，ET—1)水平，并从细胞水平探讨局部内皮素系统在腹膜纤维化形成中的作用机制，通过体外实验应用非选择性内皮素受体拮抗剂(ETA／ETB受体拮抗剂PD142893)对腹膜间皮细胞进行干预，研究腹膜局部内皮素系统在腹膜纤维化形成中的作用，探讨腹膜纤维化的发生机制及治疗策略。 研究方法：1．在本院定期随访的CAPD患者中选取26例患者，放免法测定透析液及血浆中ET—1的表达，通过腹膜平衡试验(PET)确定患者腹膜转运类型，记录超滤量。通过Pearson相关分析，单因素方差分析和线性回归方程，分析血浆与腹透液ET-1的表达和意义。以人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)为研究对象，采用放免法、免疫细胞化学检测不同时间、不同浓度的葡萄糖、甘露醇作用下人腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell，HPMC)分泌的ET-1水平。采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测局部内皮素系统ET-1、内皮素受体(ETAR、ETBR)及内皮素转化酶(ECE)的基因表达。2．相差显微镜下观察HPMC细胞的形态改变，免疫细胞化学观察细胞角蛋白(CK)、波形蛋白的表达。氚标胸腺嘧啶核苷渗入法测定细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期。乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞损伤。3．采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放免法检测不同浓度的葡萄糖、ET-1作用下Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)及转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-1β(IL-1β)蛋白水平，RT-PCR检测ColⅣ、Fn、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因表达，并在高糖和ET-1基础上加入非选择性内皮素受体拮抗剂(PD142893)，观察上述指标的变化。免疫印迹法(Westernblot)检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)蛋白水平。 和 研究结果：1．透析液中ET-1的实测值明显高于预测值(P＜0.05)。不同腹膜转运类型血浆、腹膜透析液ET-1的浓度、内皮素透析液血浆比值(D／P_(ET-1))各组间均无显著差异(P＞0.