建立AS动物模型,研究visfatin在AS小鼠血清和主动脉组织中的表达情况及小檗碱的干预作用； 2.研究AS小鼠血清脂质、血浆白介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)含量及小檗碱的干预作用； 3.研究小鼠主动脉AS斑块形态学测定,并检测AS斑块内visfatin表达,探讨小檗碱的干预作用。 4.研究visfatin是否能诱导HUVEC分泌炎症因子IL-6、TNF-α,及其促炎症作用是否受p38MAPK、ERK和JNK信号通路的调节。
5.研究小檗碱在visfatin诱导HUVEC分泌炎症因子IL-6、TNF-α过程中的干预作用及其机制是否受p38MAPK、ERK和JNK信号通路的调节。 方法： 1.动物部分 50只8周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为5组,每组10只,分别为：①模型组、②小檗碱低剂量组、③小檗碱中剂量组、④小檗碱高剂量组、⑤辛伐他汀组,均予高脂饲料喂养；以10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠作为⑥对照组,予普通饲料喂养。②、③、④组分别给予小檗碱2.5、5、7.5mg/kg腹腔注射,每日一次；⑤组给予辛伐他汀药液灌胃5mg/kg,每日一次；①、⑥组灌服等剂量生理盐水,每周测体重一次,实验为期16周。 腹腔麻醉小鼠,眼球摘除法采血。行心脏灌注,自小鼠主动脉根部至腹主动脉末端部分离整条主动脉,部分主动脉组织用4%多聚甲醛中固定,其余放入液氮中保存。 Rapamycin 主动脉组织行石蜡包埋、切片、髓染色观察小鼠主动脉组织病理形态学改变,比较各组斑块面积百分比；免疫组化法检测小鼠主动脉AS斑块visfatin的表达；分离血清及血浆,测血清甘油三脂(triglycerides, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,
LDL-C)含量；ELISA法检测血清visfatin含量及血浆IL-6、TNF-α含量；主动脉组织提取蛋白,westernblotting测小鼠主动脉visfatin的表达。用SPSS13.0软件对实验结果进行数据统计学分析,P0.05)；小檗碱高剂量组与小檗碱中剂量组、小檗碱低剂量组体重增加值无显著差异(P>0.05)。 2.血脂检测结果：模型组血脂水平显著高于对照组(P<0.05),各给药组血清TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,HDL-C高于模型组。与模型组相比,小檗碱高剂量组、辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C显著降低(P<0.05)。小檗碱高剂量组血脂水平低于小檗碱低、中剂量组,其中TG水平降低尤为明显(P0.05)；小檗碱高剂量组与辛伐他汀组差异无统计学意义(P>0.05)。 4小鼠主动脉AS斑块visfatin的表达：各给药组visfatin表达较模型组均显著升高(P<0.05)；小檗碱高剂量组与小檗碱中剂量组、小檗碱低剂量组visfatin表达均有显著差异(P0.05)。 5小鼠血清visfatin水平：辛伐他汀组、小檗碱低剂量组、小檗碱中剂量组、小檗碱高剂量组小鼠血清visfatin水平较模型组显著降低(P=0.00)；小檗碱低剂量组小鼠血清visfatin水平较小檗碱中剂量组、小檗碱高剂量组显著增高(P0.05)；小檗碱高剂量组小鼠血清visfatin水平与小檗碱中剂量组无显著差异(P=0.062)。 Selleck Sotrastaurin 6.小鼠主动脉visfatin蛋白的表达：各给药组小鼠主动脉visfatin蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)；小檗碱低剂量组小鼠主动脉visfatin蛋白表达显著高于辛伐他汀组(P<0.00)；小檗碱高剂量组小鼠主动脉visfatin蛋白表达显著低于辛伐他汀组(P<0.00)；辛伐他汀组小鼠主动脉visfatin蛋白表达与小檗碱中剂量组无显著差异(P0.05)；小檗碱低剂量组小鼠血浆IL-6与小檗碱中剂量组差异无统计学意义(P=0.277)；小檗碱高剂量组小鼠血浆IL-6与小檗碱中剂量组差异无统计学意义(P=0.343)。小檗碱高剂量组小鼠血浆TNF-α与辛伐他汀组、小檗碱中剂量组、小檗碱低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)；辛伐他汀组小鼠血浆TNF-α显著低于小檗碱低剂量组、小檗碱中剂量组(P0.05)。
8.Visfatin对HUVEC增殖的影响：visfatin浓度梯度组结果显示：50、100、150、200μg·L-1visfatin组均可显著抑制HUVEC增殖(P0.05)；visfatin时间梯度组结果显示：与对照组相比,100μg·L-1visfatin作用12h、24h、48h后均能显著抑制]3UVEC增殖(P<0.05),100μg·L-1visfatin作用24h与作用3h、6h、12h相比对HUVEC增殖抑制的差异有统计学意义(P0.05)。 9小檗碱及MAPKs通路抑制剂对visfatin影响HUVEC增殖的干预作用：50、100μmol·L-1小檗碱均可显著减轻visfatin对HUVEC增殖的抑制作用(P=0.00)；两组间无显著差异;P>0.05)。 NU7441细胞系 PD98059、SB203580和SP600125均可显著减轻visfatin对于IUVEC增殖的抑制(P0.05)；PD98059、SB203580和SP600125减轻visfatin对]HUVEC增殖的抑制能力与小檗碱组无显著差异(P>0.05)。 10.Visfatin对HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达的影响：浓度梯度组结果显示：50μg·L-1visfatin作用24h后即可显著增高HUVEC中p-ERK1/2蛋白的表达(P–0.00),100、200μg·L-1visfatin作用24h后HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达的增高较50μg·L-1visfatin组有显著差异(P=0.00)；时间梯度组结果显示：100μg·L-1visfatin作用12h后可显著增高HUVEC中p-ERK1/2蛋白的表达;P=0.024),100μg·L-1visfatin作用24h、48h组较作用12h组HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达增高的差异具有显著性(P=0.00),24h和48h两组间无显著差异(P=0.236)。 11. Visfatin对HUVEC中p-p38MAPK蛋白表达的影响：浓度梯度组结果显示：50μg·L-1visfatin作用24h后即可显著提高HUVEC中p-p38MAPK蛋白的表达(P=0.016),100μg·L-1visfatin作用24h后此作用达到峰值(P=0.