(3)应用pEGFPN1-DNEGFR在脂质体介导下稳定转染人胃癌细胞株SGC-7901、NCI-N87,应用Western blotting检测DNEGFR-EGFP蛋白的表达,光谱激光扫描共聚焦显微镜对DNEGFR-EGFP亚细胞结构定位检测,并且RT-PCR、Western blotting检测DNEGFR-EGselleckchemFP对内源性EGFR mRNA水平、蛋白及磷酸化水平的影响。 (4)应用MTT法、流式细胞术、TUNEL法、划痕实验、细胞粘附实验、体外侵袭实验、HUVEC管腔结构形成实验、裸鼠皮下移植瘤模型、微血管计数检测DNEGFR-EGFP对胃癌细胞恶性表型的作用,Western blotting、EL很少ISA检测相关蛋白明确分子机制。 结果: (1)胃癌组织中EGFR阳性表达率为48.3%,其阳性表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关。 (2)PCR扩增鉴定、双酶切鉴定、核苷酸序列测定以及生物信息学分析证实pEGFPN1-DNEGFR构建成功,并且Western blotting检测DNGW-572016 花费EGFR-EGFP蛋白的表达,光谱激光扫描共聚焦显微镜观察显示DNEGFR-EGFP蛋白主要定位于细胞膜。 (3)Western blotting检测到胃癌细胞中DNEGFR-EGFP蛋白的表达,光谱激光扫描共聚焦显微镜观察显示DNEGFR-EGFP蛋白主要定位于细胞膜,DNEGFR-EGFP降低内源性EGFR蛋白磷酸化水平,而对内源性EGFR mRNA水平及蛋白水平无影响。