另外,我们还采用裸鼠移植瘤模型,将人乳腺癌细胞接种到裸鼠皮下,观察5j的抑瘤效果。结果发现5j能显著抑制肿瘤生长,且抑瘤活性显著高于阳性药SAHA。综合所有实验数据表明,5j具有开发成治疗乳腺癌的HDACi类抗肿瘤药物的潜力。 针对APNi的筛选过程类似于HDACi的筛选,评价从酶活性水平到细胞水平,再到动物水平。本研究以猪APN和硫化叶菌APN作为APNi筛选用酶,进行酶Metformin活性筛选。对筛选获得的APNi,再选择APN高表达的HL-60,ES-2细胞检测APN抑制剂的抗肿瘤细胞增殖活性,并以APN低表达的K562细胞作为对照。综合活性试验结果,研究发现虚拟筛选获得的化合物HW02能明显抑制猪氨肽酶N的活性,其抑制常数优于阳性药Bestatin。由于不同来源的APN存在结构差异,我们又设计了采用高表达APN的细胞株HL63-deazaneplanocin A化学结构0和ES-2作为APN酶源,检测其抑制活性,发现HW02的抑酶活性明显优于阳性药Bestatin。MTT试验结果表明,HW02对多种肿瘤细胞株具有抑制增殖的作用,且主要阻滞细胞于G1期,并能诱导细胞凋亡。由于APN与肿瘤细胞的侵袭密切相关,因此我们还检测了HW02对细胞侵袭的影响,并发现HW02能显著抑制细胞侵袭。综上所述,HW02可能是一个潜在的Obeticholic Acid核磁共振具有一定抗肿瘤活性的APN抑制剂。 第四部分结论 本课题基于结构生物学的药物发现为指导思想,以两类金属蛋白酶-HDACs和APN为研究靶点,以本实验室设计合成的HDAC抑制剂与APN抑制剂为研究对象,通过构建靶点蛋白人HDAC8和古菌属硫化叶菌APN,从分子水平、细胞水平和动物水平上逐步进行活性评价,筛选发现了2个HDAC抑制剂及1个APN抑制剂,并对这几个化合物进行了药效评价与机制研究,发现这几个化合物具有一定的开发潜力。