基因沉默后生物学特性改变:流式细胞仪Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡指数。 结果 STAT3基因特异性沉默效果检测:用Western Blotting检测siRNA-STAT3-1和shRNA-STAT3-2干扰效果,具体分为5组:shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2、 shRNA-scrambled、vector和空白。在模式细胞Cilengitide株H2228中,STAT3蛋白表达下调分别为64±2.3%和52±3.7%,ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,:nTOR出现了表达下调,其磷酸化水平呈显著降低;在模式细胞H1299中,shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2分别使其STAT3表达下调65±3.1%和55±4.2%, ERK1/2, AKT,m也许TOR及对应的磷酸化蛋白无显著变化。scrambled、 vector和Fugene6三个对照组未造成STAT3表达水平在各细胞系的显著变化。 生物学特性的变化:干扰48小时后,Annexin V/PI双标记法检测发现H2228组右下象限凋亡早期细胞比例增高;H1299无显著变化。 STAT3基因过表达效果检测:用Real Time qPATM激酶抑制剂化学结构CR检测pcDNA3.1+STAT3转染H2228后的表达水平,具体分为3组:pcDNA3.1+STAT3、vector和空白。在模式细胞株H2228中,STAT3基因表达水平显著上调;应用Western Blotting检测蛋白表达发现pcDNA3.1+STAT3组蛋白表达显著升高,提示STAT3过表达模型构建成功。ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,mTOR出现了表达上调,其磷酸化水平呈显著升高。