Liver injury was assessed by serum ALT and liver histology. The expression and activity of p38 MAPK were measured by Western blot and kinase activity assays. In addition, DNA binding activities of nuclear factor kappa B (NF-κB) were analyzed by electrophoretic mobility shift assay. The effects of SB203580, a specifi c p38 MAPK inhibitor, on liver injuries and expression of proin? ammatory cytokines (interferon-γ, IL-12, IL-1β and TNF-α) were observed. RESULTS: The activity of p38 MAPK and NF-κB was increased and reached its peak 14 or 21 d AG-014699 价格 after the fi rst syngeneic S-100 administration. Inhibition of p38 MAPK activation by SB203580 decreased the activation of NF-κB and the expression of

proin? ammatory cytokines. Moreover, hepatic injuries were improved significantly KRX-0401体内 after SB203580 administration. CONCLUSION: p38 MAPK and NF-κB play an important role in an animal model of autoimmune hepatitis (AIH) induced by autoantigens.
Since its discovery in 1993,the mitogen-activated protein(MAP) kinase p38 has attracted much attention for its role in a wide range of cellular processes,many of which involve the immune system. Although p38 has been heavily implicated in the function of all type immune cells,research has tended

focus on its role in innate immunity. In this review we attempt to highlight some of the major discoveries that have been made regarding p38′s role in adaptive immunity,and also to discuss the possible future implications of these discoveries.
多种信号分子通过丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路(包括ERK、JNK、P38和BMK1),对肝星状细胞(HSC)的活化、增殖、凋亡、细胞周期产生影响,由此在多个环节干预肝纤维化的形成和逆转过程。
目的观察红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,用蛋白免疫印迹测定p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化表达。结果不同浓度红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)均有明显抑制作用,呈剂量时间依赖关系;红茶多酚(0.4mg/L)可以降低佛波酯(PMA)或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的细胞增殖(P<0.05),这种作用可以用还原型辅酶II(NADPH)氧化酶抑制剂apocynin或p38MAPK阻断剂SB203580预培养来实现;红茶多酚可以推迟血管紧张素II刺激的p38MAPK磷酸化。结论红茶多酚具有抑制内皮细胞增殖的作用,抑制PKC-NADPH氧化酶-p38MAPK信号途径可能是其重要机制之一。
支气管哮喘(简称哮喘)作为一种免疫调节异常的疾病已经取得了普遍的共识。有关哮喘免疫调节紊乱的机制,得到最广泛关注的有著名的”卫生学假说”。卫生学假说的核心是

点击此处 Th1/Th2细胞因子的平衡学说,亦即 Th1/Th2细胞所产生的细胞因子有互相制约彼此表型的分化和功能的特性。当 Th1细胞占优势时,就会抑制 Th2细胞的功能。然而,近来免疫学研究进展对这一假说提出了挑战,试图通过上调 Th1纠正 Th2的免疫偏倚以治疗变应性哮喘的思路可能是把问题过于简单化了。与此同时,有的学者也对哮喘气道高反应发生的气道重塑及细胞学基础提出了重要的论点。

We previously reported that ONO-AE-248,a selective EP3 receptor agonist,has been shown to cause neutrophil death without the typical features of apoptosis and necrosis.However,the mechanism of the neutrophil death is unclear.By using Western blotting,flow cytometry(FACS)and confocal laser scanning microscopy(CLSM),we investigated the cellular signal transduction pathways of the neutrophil death.The research results showed that the neutrophil death induced by ONO-AE-248 did not show the morphologic changes of apoptosis and was not associated with the activity of caspase-3,caspase-8,and phosphorylation of p38-MAPK.However,impairment of mitochondria transmembrane potential has been found during the process of cell death.

In addition,GL had an anti-apoptotic effect on HMGB1-treated hepatocytes.
内皮祖细胞(endothelial Seliciclib制造商 progenitor cells,EPCs)是内皮细胞的前体细胞。Asahara等[1]于1997年首先从外周血中分离出CD34+/VEGFR2+的血管EPCs,它具有向内皮细胞分化的潜能。研究结果表明,EPCs是一群主要来源于胚胎发育阶段的中胚层和出生后的骨髓、主要存在于胎肝和脐带血以及成人骨髓和外周循环血中的、能够分化为内皮细胞的多潜能细胞[2]。EPCs不仅参与人胚胎血管发生,而且参
肿瘤细胞对化疗药物的耐药性已成为肿瘤化疗的主要障碍,探索耐药性的产生机制,逆转肿瘤细胞的耐药性,是提高肿瘤化疗效果的关键。研究发现,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated

protein kinase phosphatase-1,MKP-1)与多种肿瘤细胞的耐药性密切相关。MKP-1作为MAPKs的负调节子,对肿瘤耐药性的影响大多是通过MAPK信号通路介导的;同时,其又被MAPK家族成员ERK和p38反向调控。因此,研究MKP-1影响肿瘤耐药性的机制,探讨MKP-1与其他肿瘤耐药性相关信号通路的相互联系是将来肿瘤耐药性研究方向之一。
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在诱导心肌细胞表达转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)中的作用及信号传导通路。方法培养乳鼠心肌细胞;实时定量聚合酶链式反应、蛋白质印迹和免疫细胞化学方法检测不同时间和不同浓度的TGF-β1对大鼠乳鼠心肌细胞LTBP2基因及蛋白表达的影响;用TGF-β1相关信号通路阻断剂探讨TGF-β1调节LTBP2表达改变的信号传导机制。结果 MLN9708细胞系 LTBP2基因表达随着TGF-β1浓度增加(0、2、5及10μg/L)而明显升高,在5μg/L时刺激最强(P<0.05或P
目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用。方法:采用WesternBlotting观察iNOS蛋白表达,同时采用离体微血管环张力测定技术检测血管反应性,以及细胞一氧化氮(NO)含量。结果:iNOS表达在失血性休克后逐渐增高;iNOS抑制剂可显著恢复缺氧4h的血管低反应性,抑制Ang-2进一步降低缺氧4h血管反应性的作用,去甲肾上腺素(NE)的最大收缩力(Emax)分别由5.875mN增高至8.937mN和由3.444mN增高至7.492mN(P<0.01);Ang-1,Tie-2、p38MAPK和Erk抑制剂可抑制缺氧4h的iNOS表达和增加NO生成(P<0.01)。结论:失血性休克晚期,Ang-1和Ang-2可通过p38MAPK和Erk调节iNOS蛋白表达,增加NO生成来调节血管低反应性。
糖尿病是由多种病因引起的以高血糖为特征的代谢异常综合征。随着病程延长,其代谢紊乱可导致大血管、微血管的慢性进行性病变,是糖尿病患者致死、致残的主要原因。血管内皮功能障碍是糖尿病血管病变的始发因素,骨
探讨单核细胞在炎症因子刺激下通过功能蛋白O-糖基化和p38

MAPK磷酸化、调控其对血管内皮的粘附和侵袭的分子机制。将IFN-γ与LPS体外共刺激后的THP-1细胞加至单层血管内皮细胞EA.hy926共培养,观察单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭;并通过测量电阻变化来反应血管内皮通透性的改变。采用Western NVP-BEZ235 blot方法检测单核细胞THP-1中p38 MAPK磷酸化的变化,O-GLcNAc糖基转移酶(OGT)和O-GLcNAc糖基化蛋白表达量的变化。分析验证p38 MAPK抑制剂对IFN-γ与LPS诱导的单核细胞对血管内皮粘附和迁移的影响,同时检测OGT、O-GLcNAc糖基化蛋白差异表达的影响。结果显示,IFN-γ与LPS可以共作用促进THP-1对血管内皮的粘附和侵袭,降低血管内皮通透性。同时激活p38

MAPK,此过程与OGT及O-GLcNAc糖基化蛋白表达降低相关。采用p38抑制剂预处理,可逆转上述IFN-γ与LPS诱导的生物学变化。综上,在炎症反应中,单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭力的变化受功能蛋白糖基化和磷酸化的双向调控。
目的研究骨碎补总黄酮(TFDF)对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号蛋白的影响,探讨骨碎补总黄酮防治骨质疏松的作用机理。方法二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞以及活性观察;pNPP、ELISA、茜素红染色法分别检测不同质量浓度晚期糖基化终末产物对成骨细胞碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(Col I)、骨钙素(BGP)以及矿化能力的影响,并观察骨碎补总黄酮对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化的干预;Western-blot检测骨碎补总黄酮对晚期糖基化终末产物作用下,成骨细胞p38和ERK1/2蛋白磷酸化的影响。结果晚期糖基化终末产物(2004、00、800 mg/L)可以降低成骨细胞表达ALP、Col I、BGP,降低其矿化能力。骨碎补总黄酮可以剂量依赖性的提高晚期糖基化终末产物(400 mg/L)作用下成骨细胞表达ALP、Col I、BGP和矿化能力。骨碎补总黄酮(50 mg/L)可以提高晚期糖基化终末产物(400 mg/L)作用下p38和ERK1/2的蛋白磷酸化。结论骨碎补总黄酮可以提高晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化和矿化能力,其机制可能和提高p38和ERK1/2信号蛋白的磷酸化有关。
前期研究证明,降钙素基因相关肽(CGRP)具有较强的血管扩张作用,能够抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖。VSMC中,NADPH氧化酶1(Nox1)活性增加被认为是O2.

骨髓移植实验证明免疫细胞在PDCD4缺失导致动脉粥样硬化减弱过程中发挥主要作用 (1)分别收集Pdcd4-/-和C57BL/6小鼠股骨和胫骨中骨髓细胞,通过尾静脉注射移植入受致死剂量X射线照射的Ldlr-/-小鼠体内,高脂喂养12周和16周后,分别处死小鼠,主动脉根部制备冰冻切片,HE和油红O染色观察并比较斑块的大小。 (2)冰冻切片进行免疫组化染色比较巨噬细胞和T细胞在斑块局部的浸润情况。 (3) Western blot的方法检测骨髓移植后高脂喂养2周、12周和16周的Ldlr-/-小鼠血管斑块中PDCD4的表达。

2.体内实验研究PDCD4缺失对巨噬细胞和T细胞亚群的影响 (1)Pdcd4-/-Apoe-/小鼠和Apoe-/-小鼠高脂喂养8周或16周后,研磨小鼠脾脏,制备脾细胞的单细胞悬液,用流式细胞术的方法检测并比较巨噬细胞和T细胞各亚群(CD4+,CD8+,Th17,Treg)比例的变化,并用直线回归的方法分析其比例与斑块面积大小的相关性。 (2)冰冻切片免疫荧光或免疫组化染色比较斑块局部CD4+和CD8+比例的变化。 3.体内实验研究PDCD4缺失对巨噬细胞和T细胞相关细胞因子的影响 (1)血清中：流式细胞微球芯片试剂盒和ELISA的方法检测并比较Pdcd4-/-Apoe-/-和Apoe-/-小鼠高脂喂养后血清中细胞因子(IL-2,IL-4,IL-6,IFN-γ, TNF-α, IL-17, IL-10, TGF-p)的改变,并用直线回归的方法分析细胞因子浓度与斑块面积大小之间的相关性。 什么 (2)斑块局部： 1)冰冻切片免疫双荧光染色比较斑块局部IL-17和IL-10水平的变化。 2)将含有大量斑块的主动脉弓及胸腹主动脉血管组织裂解提取RNA或蛋白,分别用real time PCR或Western

blot的方法检测并比较斑块局部细胞因子的改变。 4.体外实验研究PDCD4对T细胞功能的影响及其机制 (1)对T细胞增殖能力的影响： 1)体外培养脾细胞并刺激活化,CCK8试剂盒检测并比较实验组与对照组的增殖情况。 2)流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞的增殖情况。 3)流式细胞仪分别检测CD4+和CD8+T细胞中协同刺激分子CD28、CD137和协同抑制分子CTLA-4比例的变化。 (2)对T细胞分泌细胞因子的影响：流式细胞微球芯片试剂盒检测并比较培养上 有 清中细胞因子的改变。 5.体外实验研究PDCD4对巨噬细胞功能的影响：收集Pdcd4-/-和C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞进行体外培养,并用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激不同的时间段使其活化,ELISA的方法检测并比较培养上清中促炎性细胞因子IL-6、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10的浓度。 6.体内干预治疗确定IL-17和IL-10在PDCD4缺失减弱动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用：以Apoe-/-小鼠做正常对照,将Pdcd4-/-Apoe-/-小鼠分为三组,高脂喂养4周后分别给予生理盐水、重组IL-17细胞因子和IL-10中和性抗体腹腔注射一周一次,共注射5周,处死小鼠,主动脉根部制备冰冻切片,HE和油红O染色观察并比较斑块的大小。 7.分子机制研究探讨PDCD4从翻译水平还是转录水平调控IL-10的表达 (1)RNA蛋白结合免疫沉淀试剂盒(RIP)获得与PDCD4结合的全部RNA, real time PCR扩增IL-10,确定PDCD4是否与IL-10mRNA形成复合体从而确定PDCD4是否从翻译水平调控IL-10的表达。 (2)提取活化巨噬细胞的总RNA,用RT-PCR的方法检测并比较IL-10在mRNA水平的表达。 (3)提取活化巨噬细胞的蛋白,用Western

blot的方法检测并比较MAPK (JNK,ERK1/2,P38)信号通路的活化情况,并通过加入信号通路抑制剂后ELISA检测上清中IL-10的表达情况确定PDCD4通过哪条信号传导通路调控IL-10的转录。 结果 一、PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达与作用 1.动脉粥样硬化小鼠模型的建立我们给予8周龄的Apoe-/-小鼠高脂饲料喂养,造成体内高血脂坏境,诱导斑块的形成。分别取8周龄(未高脂)做为无斑块期,16周龄(高脂8周)做为早期斑块期和24周龄(高脂16周)做为晚期斑块期。 2. PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达 还有 为了明确PDCD4在动脉粥样硬化发展过程中的表达情况,我们分离16周和24周Apoe-/-小鼠富含斑块的主动脉弓及胸腹主动脉裂解蛋白,以8周龄无斑块血管为对照,western blot的方法检测了PDCD4的表达情况,结果显示随着高脂喂养时间的延长(即动脉粥样硬化斑块的发展)PDCD4的表达明显升高。免疫组化染色发现PDCD4主要表达于免疫细胞(巨噬细胞和T细胞),另外,在平滑肌细胞中也有表达,提示PDCD4可能具有促进动脉粥样硬化斑块形成和发展的作用。 3. PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用 为了研究PDCD4在动脉粥样硬化形成过程中的作用,我们制备了Pdcd4和Aope双基因敲除(Pdcd4-/-Apoe-/-)小鼠,并以此小鼠为实验组,以Apoe-/-小鼠为对照组,研究了PDCD4缺失对动脉粥样硬化形成的影响。结果发现高脂喂养8周或16周后Pdcd4-/-Apoe-/小鼠主动脉根部的斑块和主动脉弓及胸腹主动脉段的斑块较对照组相比,面积均明显减小(p<0.01),脂质沉积减少(p<0.01),局部巨噬细胞和T细胞的浸润都较对照组明显减少(p<0.05)。另外,胶原含量、平滑肌细胞也明显减少(p<0.01),CD4+T细胞比例呈降低趋势,其中CD4+Foxp3+调节性T细胞(Treg)比例明显上升(p<0.01),而TregCFoxp3+)细胞数量占斑块面积的比例则比对照组明显升高(p<0.05),而IL-17和TGF-β浓度较对照组降低(p<0.05),而IL-10明显高于对照组(p<0.05),而TGF-β较对照组升高(p<0.05)；提供抑制信号的CTLA-4在CD4+和CD8+T细胞上的表达均较对照组升高(p
帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一种常见的神经退行性疾病,在65岁以上人群中PD的患病率为1%-3%,其临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势不稳。PD由英国医师James B.

0软件设计PLGF、GAPDH两者的引物和Taqman探针 (2)利用Trizol试剂提取细胞总RNA (3)重组质粒pUCmT-PLGF的构建 (4)重组质粒pUCmT-GAPDH的构建 (5)real-time PCR检测人肺癌细胞系中PLGF的mRNA表达水平 二、PLGF沉默对小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障的作用的研究 1、以腺病毒为载体的RNAi载体的构建 (1)含目的基因(siPLGF)的穿梭子(shuttle)构建 ①构建双链siPLGF：双链短发夹oligo DNA退火连接 ②线性化shuttle空载体与双链siPLGF的连接 ③重组质粒的转化、筛选和鉴定 (2)腺病毒的重组 ①线性化载体shuttle(si PLGF) ②shuttle和pAdEasy腺病毒载体共转化细菌BJ5183 ③重组子的筛选和鉴定 ④重组子(Ad-shuttle-siPLGF)的大量扩增 2、病毒颗粒的包装 (1) HEK293细胞的培养 (2)初级病毒颗粒的形成

(3)二级病毒颗粒的形成 (4)三级病毒颗粒的形成 (5)病毒颗粒滴度的测定 3、NCI-H250细胞的感染及沉默功能的鉴定 (1) NCI-H 250细胞的感染 (2) real-time PCR方法鉴定RNA干扰效果 4、具有PLGF沉默效应的NCI-H250细胞功能鉴定

(1)荧光定量方法检测有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞穿过HBMEC单层的情况 不 (2)检测有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞对体外血脑屏障模型跨膜电阻抗(TEER)的影响 并且 (3)检测有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞对体外血脑屏障模型通透性的影响：HRP通过率分析 (4)免疫荧光法观察有、无PLGF沉默效应的NCI-H250细胞穿过HBMEC单层时对紧密连接结构蛋白ZO-1的影响 三、PLGF改变脑微血管内皮细胞间紧密连接的分子机制的研究 1、检测PLGF重组蛋白对体外培养的HBMEC单层渗透性的影响 (1) Trailswell体外血脑屏障模型的建立 (2)检测PLGF对体外血脑屏障模型跨膜电阻抗(TEER)的影响 (3)检测PLGF对辣根过氧化物酶(Horse-radish peroxidase，HRP)穿过率的影响 2、观察PLGF重组蛋白对HBMEC间紧密连接结构的影响 (1)免疫荧光法观察PLGF对体外培养的HBMEC间紧密连接(tightjunction，TJ)结构蛋白ZO-1的影响 (2) Westem blot方法检测PLGF对体外培养的HBMEC间紧密连接结构蛋白occludin的影响 3、观察PLGF重组蛋白对Rho酪氨酸激酶活化的影响 (1)观察ROCK，Rho，PI3K，PKC，ERK抑制剂作用下，PLGF对HBMEC的诱导作用 (2) Pull-down方法检测Rho酪氨酸激酶的活化情况 (3) Westernblot方法检测cofilin的变化情况 4、免疫荧光法观察HBMEC细胞骨架微丝的变化

结果 一、PLGF在肺癌中的表达 1、免疫组织化学方法检测PLGF在肺癌组织标本中的表达 (1)对72例SCLC、45例人肺腺癌、24例人肺鳞癌和5例癌旁组织标本进行免疫组织化学染色，结果显示，在小细胞肺癌、肿鳞癌和肺腺癌中均有PLGF阳性细胞表达。 (2)对免疫组织化学染色结果进行灰度扫描，对Integrated OD Average值做t-检验，PLGF在肺腺癌中高表达；在SCLC和肺鳞癌中表达略低于肺腺癌。 (3)在72例SCLC中，有20例(27.8％)PLGF高表达，52例(72.2％)PLGF低表达；对PLGF高达表组和PLGF低表达组患者淋巴结转移数目进行比较，p＜0.05，存在统计学意义。 2、RT-qPCR检测肺癌细胞系中PLGF mRNA的表达情况 六株组织学不同、来源不同的肺癌细胞系中，PLGF 还有 mRNA表达水平不同：NCI-H 250细胞(来源于SCLC脑转移灶的细胞株)PLGF高表达；NCI-H 209细胞(来源于SCLC骨髓转移灶的细胞株)PLGF表达略低；NCI-H 446(来源于SCLC胸水渗漏的细胞株)PLGF低表达；A549(肺腺癌细胞系)和BE1、LH7(大细胞肺癌)PLGF也呈低表达。 二、PLGF沉默对小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障的作用的研究 1、以腺病毒为载体的RNAi系统的构建 成功构建了携带短发夹siPLGF的穿梭载体：shuttle(siPLGF)，并与腺病毒骨架载体成功重组，获得了六个腺病毒RNAi重组子(Ad-shuttle-siPLGF)。 2、完成HEK293细胞三次病毒包装并获得了纯化病毒颗粒，含量为1.5×10~11virus。 3、AD-shuttle-si PLGF感染NCI-H 250细胞 (1)利用携带si-PLGF腺病毒颗粒感染NCI-H250细胞，感染率可达80％。 (2)利用RT-qPCR检测感染病毒颗粒的NCI-H250，Ad-shuttle-si PLGF细胞与Ad-shuttle-scramble组细胞相比，PLGF mRNA表达明显降低，并存在统计学意义(p＜0.

52μg/mL。细胞实验结果显示，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著抑制Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）水平，促进Th1细胞因子（IFN-γ，紫菜多糖还能促进IL-10的产生）的产生，紫菜多糖和龙须菜寡都能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。紫菜多糖诱导IFN-γ的产生是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。 综上所述，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著降低小鼠血清特异性IgE和IgG1的水平，促进IgG2a的水平，能够促进Th1细胞因子的水平，抑制Th2细胞因子的水平，能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。这些结果说明紫菜多糖和龙须菜寡糖能够有效调节辅助性T细胞的免疫功能向Th1细胞转换，使Th1、Th2细胞重新处于相对平衡状态，从而抑制Th2细胞主导的食物过敏反应。
肿瘤（Tumor）已成为当前人类健康的一大杀手，严重威胁着人们的生命与健康。肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤，是导致癌症相关死亡的主要因素。于此同时，动物肿瘤病的发病率和病死率也呈上升趋势。马立克氏病（Marek’s

disease，MD）等肿瘤病具有高致病性和传染性，给畜牧业生产造成了严重损失。中药治疗肿瘤具有许多优势，从天然植物中寻找抗肿瘤活性成分是抗肿瘤药物研发的热点。秦岭主峰太白山为我国三大“药山”之一，中草药资源丰富，其中有149种以“七”字命名的药用植物，即太白“七药”。本研究从太白“七药”中筛选出6味中草药组成抗肿瘤中药方剂“肿瘤消”。为了验证“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性和作用机理，以人肺腺癌A549细胞和马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞为主要的体外肿瘤细胞模型，对“肿瘤消”方剂诱导肿瘤细胞凋亡的作用和机理进行了研究，目的在于为科学、合理地开发太白山中草药资源提供指导，为临床抗肿瘤药物筛选提供理论支持。

Selleckchem RGFP966 （1）“肿瘤消”方剂对多种肿瘤细胞具有抗肿瘤活性。采用MTT法对“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性进行了检测，结果表明“肿瘤消”方剂对马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞、人肺腺癌A549细胞、大鼠胶质瘤C6细胞、小鼠骨髓瘤SP2/0细胞和人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用，但对正常人胚肾293A细胞的增殖无显著影响。 更多 （2）“肿瘤消”方剂具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。采用细胞形态学观察和Hoechst332580染色法对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的作用进行了检测，两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导A549细胞凋亡的作用；采用DNA片段化分析和线粒体膜电位势能检测法对“肿瘤消”方剂诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用进行了检测，两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用；采用AnnexinV/PI双染法，流式细胞仪检测分析“肿瘤消”方剂对肿瘤细胞（MDCC-MSBl、A549、C6、SP2/0、HeLa）凋亡率的影响，结果证实“肿瘤消”方剂作用后肿瘤细胞的凋亡率明显上升。 （3）“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p38MAPK信号通路的持续活化，是由死亡受体途径和线粒体途径共同介导的。采用Western Blotting对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路进行检测，同时对细胞凋亡信号通路相关调控基因（p38、p-p38、p53、p-p53、Bax、Bcl-2）的表达水平进行检测。Western RO4929097浓度 Blotting检测结果证实“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p-p38MAPK信号通路的持续活化，与死亡受体（TNF-R1、DR5）活化以及caspase8活化有关，启动细胞凋亡外源性死亡受体途径。此外，“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡过程中，上调了p53基因的蛋白表达水平，进而上调Bax表达水平，同时下调Bcl-2的表达水平。在Bcl-2和Bax共同调节作用下，线粒体膜电位下降，cytochrome

c从线粒体释放到细胞质，导致caspase9活化，启动细胞凋亡内源性线粒体凋亡途径。死亡受体通路和粒体途径在均caspase3处汇合，诱导A549细胞发生凋亡。
凡纳滨对虾（Litopeneaus vannamei），又称南美白对虾、万氏对虾，由于其具有生长速度快、抗病能力强、适合高密度养殖和营养成分高等优点，成为我国乃至世界对虾养殖中的主要品种，然而，我国凡纳滨对虾养殖仍然受到营养、品种及病害的制约。研究凡纳滨对虾肌肉生长发育和免疫系统根本机制，为提高凡纳滨对虾生长速度和抗病能力提供理论依据，对凡纳滨对虾高效健康养殖具有重要的意义。 本研究中通过同源克隆获得了凡纳滨对虾p38的cDNA部分序列并对其进行了生物信息学分析，同时利用实时定量PCR检测了p38的组织分布和蜕壳周期不同阶段表达量变化，然后通过双链RNA干扰和抑制剂阻断法分别沉默p38的表达和抑制p38酶活性后检测肌肉相关基因表达量的变化，最后分析了p38在不同细菌和病毒感染后的表达规律和白斑综合症病毒感染后虾体内病毒拷贝数的变化规律。 实验结果表明，本研究克隆获得了凡纳滨对虾p38cDNA部分序列，克隆片段长1206bp，包括1098bp的开放阅读框，编码365个氨基酸，蛋白分子量为41.87kDa、等电点约为6.

05;前肢上抬实验第3天:治疗组为73.3±30.5%:对照组46.7±33.6%,p＜0.05;前肢应用协调实验第1天:治疗组为26.8±17.2%:对照组47.2±17.4%,p＜0.01。

3结论 脑出血后脑组织内存在长时间的铁离子过载现象,尤其是游离铁水平持续维持在高水平状态,可能是导致长时间铁离子介导的过氧化损伤、出现持久性神经功能损害的重要原因。铁离子螯合剂去铁敏能显著降低大鼠脑出血后脑脊液内游离铁水平,但并不能促进脑组织内总铁水平的下降,由此可以推测,去铁敏主要是通过结合及抑制铁离子活化(游离铁形成)而非促进铁离子外排出脑组织,达到减轻游离铁介导的过氧化损伤作用。脑出血后的铁离子过载与血红素加氧酶(HO-1)表达水平上调显著相关,去铁敏治疗在抑制游离铁水平上升的同时也轻微上调了HO-1的表达,表明去铁敏除了作为游离铁螯合剂外,可能还具有其它神经保护作用。 第二部分丝裂原活化蛋白激酶在大鼠脑出血后继发性脑损伤中的作用及其与铁离子过载关系的实验研究 丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,广泛存在于哺乳动物细胞的胞质中,参与调节细胞生长、发育、分裂、死亡以及细胞间的功能同步等一系列生命活动;目前研究得最广泛的是ERK1/2、JNK和p38 没有 MAPK三种MAPK。大量研究发现在各种脑退行性疾病(诸如脑淀粉样变性、Alzemer’s病等)以及缺血性脑卒中、蛛网膜下腔出血的脑损伤反应过程中,均有上述三种MAPKs激活的身影,而采用ERK1/2、JNK或p38 selleckchem MAPK抑制剂能拮抗缺血再灌注损伤所诱导的细胞凋亡和神经元损伤。但是,有关MAPKs激活与否及其在另一种常见的脑血管意外——脑出血中的作用则鲜有报道。此外我们先前的研究已证实铁离子过载尤其是游离铁的积聚是大鼠脑出血后继发性脑损伤以及神经功能损害的重要因素,然而由铁离子介导的脑出血后继发性脑损伤的细胞内信号途径目前并不清楚,铁离子是否能激活脑出血后MAPKs信号通路表达及其作用效应尚需要得到实验的证实。本研究将对脑出血后MAPKs的激活情况及其与铁离子过载之间的关系进行探讨。 1材料和方法 (1)实验动物及分组:本研究采用随机对照动物实验,采用清洁级Sprague-Dawley雄性成年大鼠36只,体重300g～350g。研究分为两个部分,第一部分探讨成年大鼠脑出血后脑组织MAPKs激活状态及变化情况;第二部分探讨铁离子对MAPKs激活的作用以及铁离子螯合剂去铁敏干预治疗对MAPKs激活的影响。

(2)大鼠脑出血后脑组织MAPKs激活状态及变化的研究:该部分对照组为生理盐水脑内注射组(n=3),实验组为脑出血组(n=9)。大鼠自体血注入脑出血模型的建立办法参见摘要第一部分。在对照组中,除采用等量生理盐水取代自体血以外,其余操作相同。模型建立成功后,分别于术后1、3、7天随机处死实验组大鼠,每时相位点各3只大鼠。应用蛋白印迹分析检测脑组织内磷酸化MAPKs表达水平变化。 (3)铁离子对MAPKs激活的作用以及去铁敏干预作用的研究:该部分对照组为生理盐水脑内注射组(n=6),实验组为脑出血组(n=12)和氯化亚铁(Fecl_2)脑内注射组(1mmol/L,n=6)。大鼠自体血注入脑出血模型的建立办法参见摘要第一部分。在对照组中,除采用等量生理盐水取代自体血以外,其余操作相同;氯化亚铁(Fecl_2)脑内注射组先行将Fecl_2溶解于用生理盐水,制备成1mmol/L溶液,然后将30μl

1mmol/L Fecl_2注入大鼠脑内,注射方法同脑出血模型建立方式。对脑出血组再随机分成两组(n=6),一组给予去铁敏治疗(100mg/kg,腹腔内注射,出血后2小时给药,随后间隔12小时给药一次),另一组给予同等量的生理盐水(给药方式同去铁敏组)。各组模型均于术后1天处死,分别采用蛋白印迹分析及免疫组织化学方法检测磷酸化ERK1/2、JNK和p38 MAPK蛋白表达,每组各3只。 (4)蛋白印迹分析(Western Blot Analysis) 蛋白印迹分析步骤参考第一章摘要,采用的一抗分别有的Mouse anti-phospho-ERK1/2(1:1000),Rabbit anti-phospho-JNK(1:1000)以及Rabbit selleck anti-phospho-p38MAPK(1:1000)的稀释液,二抗分别选用的1:2000稀释液的过氧化物酶共轭的山羊抗兔抗体或兔抗鼠抗体。抗原抗体复合物通过化学发光系统而显影,应用Kodak X-OMAT胶片摄片。条带的相对密度应用NIH Image(Version 1.61)分析。 (5)免疫组织化学分析(Immunohistochemistry Analysis) 免疫组化分析步骤参考第一章摘要,应用亲和素-生物素复合物法进行检测,采用的一抗分别有的Mouse anti-phospho-ERK1/2(1:200),Rabbit anti-phospho-JNK(1:200)以及Rabbit anti-phospho-p38 MAPK(1:200)的稀释液,二抗分别选用的1:400稀释液的生物素化山羊抗兔抗体或兔抗鼠抗体。阴性对照采用正常兔IgG或缺失一抗的办法。 2结果 (1)实验大鼠生理参数:所有实验大鼠的生理参数在术前及术后1小时立即进行检测。平均动脉压、血PH、PaO_2、PaCO_2、红细胞压积(Hematocrit,Hct)以及血糖均控制在正常范围(平均动脉压:70～100mmHg、血PH:7.4～7.

0%、20.0%;控制率分别为93.3%、53.3%,实验组具有更好的疗效及安全性。结论能否将克唑替尼应用于EML4-ALK基因阳性NSCLC患者的一线治疗,有待于大样本的临床试验进一步确定。
转化医学作为一种医学科学研究新理念,其核心是在实验室与临床之间建立一个沟通桥梁。药理学是生命科学领域中一门特殊的重要桥梁学科,是转化医学的重要形式。药理学的发展可以有效地将基础医学和临床医学、药学和医学、化学与生命科学、工程科学与医学、基础科学与临床医学紧密结合起来,形成这些学科之间的桥梁,最终实现药物防治疾病的临床应用目的。推动药理学的学科发展,是实现转化医学发展的重要途径,是实现转化医学最终目标的核心内容。
具有强效抗肿瘤活性的新型PI3K-p110β/Δ抑制剂KA-2164[关键词]KA-2164;PI3K-p110β/Δ抑制剂;抗肿瘤活性[中图分类号]R979.1Karus Therapeutics公司研发的KA-2164是一种口服PI3K-p110β/Δ抑制剂,临床前研究显示其具有潜在的抗癌活性。KA-1264对人胶质母细胞瘤U-87MG细胞的IC50为1

800 nmol·L-1。KA-2164对多种PTEN缺陷型肿瘤细胞系具有抗增殖活性,IC50范围为
T790M突变是表皮生长因子受体(EGFR)敏感突变的非小细胞肺癌患者接受靶向治疗耐药的主要机制之一。研究表明,T790M突变在靶向治疗前即存在并具有一定预测疗效和预后的作用。本文就T790M在非小细胞肺癌靶向治疗作用的最新研究进展作一综述。
Hsp90作为热休克蛋白家族中的重要一员,是一种对细胞生存所必需的分子伴侣,它发挥着稳定顾客蛋白构象、维持其功能的作用。许多顾客蛋白在肿瘤中处于过度表达或持续激活状态,与肿瘤的发生发展有着密切的关系。因此,Hsp90在近年的研究中倍受关注,已经发展为抗肿瘤治疗的良好靶点,目前已经有多个Hsp90抑制剂进入临床实验。近年随着肿瘤分子生物学的研究,肿瘤分子靶向治疗已取得明显成果,针对多种癌症已获得了多个用于靶向治疗的单克隆抗体或小分子化学物质,如用于治疗某些HER2阳性乳腺癌的曲妥珠单抗、用于治疗NSCLC的吉非替尼等。然而随着这些药物的应用,肿瘤耐药性不可避免的产生。多方面研究表明Hsp90抑制剂会引起与耐药相关的多个分子的降解,提示其在拮抗耐药方面具有重要的意义。本文就Hsp90分子抑制剂在拮抗肿瘤耐药方面的研究进行综述。
目的探讨Puma对于卵巢癌细胞生长及体内成瘤的影响,了解其行使功能的分子机制。方法采用腺病毒载体实现Puma在卵巢癌细胞中的过表达,并通过CCK-8检测细胞增殖情况,通过Annexin-V染色测定细胞凋亡情况,通过小鼠荷瘤实验确定卵巢癌细胞体内成瘤能力。并进一步通过Western

selleck screening library 以及 blot的方法检测了细胞凋亡相关基因Caspase-9和Bax蛋白的表达及定位情况。结果成功构建hTERT基因启动子介导的Puma基因腺病毒表达载体,并实现Puma基因在卵巢癌细胞中的过表达,过表达Puma后,卵巢癌细胞增殖被明显抑制(P<0.05),细胞凋亡增加,从对照组细胞的7.2%增加为过表达组的29%(P
随着厄洛替尼、吉非替尼、埃克替尼等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的应用,EGFR突变的非小细胞肺癌患者的PFS和OS得到了延长。然而在临床治疗过程中,EGFR-TKIs耐药的出现往往导致治疗最终失败。EGFR-TKIs的耐药包括原发性耐药和获得性耐药,尽管目前对EGFR-TKIs耐药机制的研究取得了一些成果,但是许多耐药机制并未明确。中医药联合EGFR-TKIs治疗进展期非小细胞肺癌中在临床中可见到明确疗效,而研究中医药在对抗EGFR-TKIs耐药有很大的前景。文章主要论述了原发性、获得性耐药机制和中医药在对抗EGFR-TKIs耐药机制上的进展。
As molecular targets

continue to be PDE 抑制剂 identified and more targeted inhibitors are developed for personalized treatment of non-small cell lung cancer(NSCLC), multigene mutation determination will be needed for routine oncology practice and for clinical trials. In this study, we evaluated the sensitivity and specificity of multigene mutation testing by using the Snapshot assay in NSCLC. We retrospectively reviewed a cohort of 110 consecutive NSCLC specimens for which epidermal growth factor receptor(EGFR) mutation testing was performed between November 2011 and December 2011 using Sanger sequencing. Using the Snapshot assay, mutation statuses were detected for EGFR, Kirsten rate sarcoma viral oncogene homolog(KRAS), phosphoinositide-3-kinase catalytic alpha polypeptide(PIK3CA), v-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1(BRAF), v-ras neuroblastoma viral oncogene homolog(NRAS), dual specificity mitogen activated protein kinase kinase 1(MEK1), phosphatase and tensin homolog(PTEN), and human epidermal growth factor receptor 2(HER2) in patient specimens and cell line DNA. Snapshot data were compared to Sanger sequencing data. Of the 110 samples, 51(46.4%) harbored at least one mutation.

Unfortunately, some of these new approaches have met with mixed results. Furthermore, no clear metrics are available to determine whether these designs are more successful than previous

strategies. This review examines the evolution of phase I trials and draws upon several examples of strategies that have been successful as well as those that have not, and outlines a pragmatic approach to phase I trials as our understanding of the molecular biology of individual malignancies emerges.
利用局部和全身两种不同的治疗途径,科学家宣称他们在肺癌和黑色素瘤的治疗上取得了积极的进展。治疗上的一大进步针对进展期肺癌某些异常的基因,通过靶向治疗,大部分患者肿瘤明显缩小。尽管临床试验在82例患者的小范围内进行,而且也无对照组,但试验结果却有显著的临床价值。相关报告近期在
2010年ASCO会议上,关于非小细胞肺癌的研究精彩纷呈,将影响今后NSCLC的临床实践及研究方向,全文就晚期NSCLC的有关治疗进展作一综述。
传统的化疗治疗晚期非小细胞肺癌已经到了一个平台期,靶向药物为突破这一”瓶颈”提供了行之有效的解决方案。文中系统回顾了近年来的大型随机临床研究,提供目前靶向药物在晚期非小细胞肺癌中的应用规范,并提出靶向治疗中存在的问题及可能解决的方法。
1文献来源研究一:Takeuchi

Cilengitide分子重量 K,Choi YL,Soda M,et al.Multiplex HER-2 抑制剂 reverse transcription-PCR screening for EML4-ALK fusion transcripts[J].Clin Cancer Res,2008,14(20):6618-6624.
非小细胞肺癌切除后辅助化疗问题一直存在争议。已证明Ⅱ-Ⅲa期可从辅助化疗中获益,Ⅰb期可口服辅助化疗获益。尽管新药物的出现有力地提高了辅助化疗的疗效,但患者依从程度的提高有待于给药方案的改进。肿瘤分子标志物和酪氨酸激酶抑制药是今后提高术后辅助化疗疗效的研究方向。

上海抗肿瘤药专利创收四亿元我国自主知识产权生物医药专利向世界证明了自身价值。2010年8月26日,中科院上海生科院知识产权与技术转移中心宣布,将一项蛋白抗肿瘤药物专利授权给跨国制药集团赛诺菲-安万特公司,合同金额超过4亿元,并外加日后销售额提成。业内认为,此项专利作价之高,在国内科研领域堪称罕见。上海生科院生化与细胞所的这一成果,被国际肿瘤生物学权威杂志《癌细胞》以11页篇幅报道,并随刊配发了由两位美国科学家撰写的2页评论,称中国科学家所做工作乃”肿瘤新生血管形成研究‘必读’”。
MTH1酶属于Nudix水解酶,具有清理细胞核苷酸池内氧化嘌呤核苷酸,防止核酸氧化损伤的功能。多项研究表明MTH1酶在神经退行性疾病、抗衰老等,尤其是抗肿瘤方面发挥关键作用,有望成为抗肿瘤药物的新靶标。近年国内外有关MTH1酶抑制剂的研究也逐渐增多,该文概述了MTH1酶的转录和翻译、结构特点、催化机制、应用等各方面信息,特别是对其各类抑制剂的研究现状进行了较为全面的综述。
Pancreatic

cancer is an extremely aggressive disease; although progress has been made in the last few years, the prognosis of these patients remains dismal. FOLFIRINOX is now considered a standard treatment in first-line setting, since it demonstrated an improved overall and progression-free survival vs gemcitabine alone. However, the enthusiasm over the benefit of this three-drug regimen is tempered by the associated increased toxicity profile, and many efforts have been made to improve the feasibility TAE684化学结构 of this schedule. After a more recent phase Ⅲ trial showing an improved outcome over gemcitabine, the combination of gemcitabine/nab-paclitaxel emerged as another standard first-line treatment. However, this treatment is also associated with more side effects. In addition, despite initial promising data on the predictive role of SPARClevels, recent studies showed that these levels are not associated with nab-paclitaxel efficacy. The choice to use this treatment over FOLFIRINOX is therefore a topic of debate, also because no validated biomarkers to guide FOLFIRINOX treatment are available.

56门脉高压患者中,9例未出现胃病,另外47例有不同程度的胃黏膜病变,PHG评分为1,2,3分分别有26,15和6例；2.免疫组化,Western blot显示Hsp70在PHG胃黏膜表达水平下降,在重度PHG患者中下降水平显著,P
目的建立肾癌细胞OS-RC-2骨转移动物模型，获得病灶肿瘤细胞株，并对两组细胞间的基因表达谱进行对比分析，筛选差异表达基因。 方法通过胫骨平台向胫骨髓腔内注射OS-RC-2细胞，待局部成瘤后取病灶肿瘤细胞，循环注射，最后获得的肿瘤细胞株与OS-RC-2细胞之间分别以MTT法检测增殖能力，Transwell法检测侵袭能力，流式细胞技术检测细胞周期变化。提取两组细胞的mRNA，通过基因芯片技术进行杂交扫描和分析，结合KEGG网站数据库的信号通路分析，筛选出相关基因，并以RT-PCR及Western 点击此处 blot法分别验证筛选出的基因在mRNA及蛋白水平上的表达差异。 结果建立肾癌骨转移动物模型，获得高骨转移能力细胞株OS-RC-2-BM-3，基因芯片扫描得到差异基因共1196个，其中上调基因926个，下调基因270个，根据KEGG数据库筛选出HIF-1α及HSP90，RT-PCR结果及Western结果均与基因芯片扫描符合。 结论肾癌细胞OS-RC-2骨转移与多个基因相关，其中HIF-1α及HSP90可能起到关键作用。
实验目的： Epipolythiodioxopiperazines (ETPs)类化合物是从真菌中提取出来的一种次生代谢产物,近年来发现这类化合物很多具有抗肿瘤作用。军事医学科学院车永胜课题组以Verticilin为母核,对其进行结构改造,合成得到新的具有抗肿瘤活性的衍生物G226。本课题对G226体内外抗肿瘤作用进行系统评价,并探索其抗肿瘤作用靶点和分子机制。

方法与结果： 第一部分G226体内外抗肿瘤作用评价 采用磺酰罗丹明B蛋白染色法和CCK-8测定G226体外细胞毒实验,结果显示,(G226对包括白血病、肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、结肠癌和膀胱癌等在内的肿瘤细胞具有较强的增值抑制作用,没有明显的系统选择性,平均ICso为86.6nmol/L,抗肿瘤活性强于阿霉素(adriamycin,ADR, IC50=230.3nmol/L)。我们选用人乳腺癌MDA-MB-231裸小鼠皮下移植瘤模型评价该化合物体内抗肿瘤作用,结果显示0.5mg/kgG226,每三天给药1次,能显著抑制移植瘤的生长,第21天时抑瘤率达到60.82%。 第二部分G226抗肿瘤作用机制研究 第一节G226诱导肿瘤细胞自噬和凋亡的发生及其相关机制 {Selleck Anti-cancer Compound Library|Selleck Anticancer Compound Library|Selleck Anti-cancer Compound Library|Selleck Anticancer Compound Library|selleck Anti-cancer Compound Library|selleck Anticancer Compound Library|selleck Anti-cancer Compound Library|selleck Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library|Anticancer Compound Library|buy Anti-cancer Compound Library|Anti-cancer Compound Library半抑制浓度|Anti-cancer Compound Library价格|Anti-cancer Compound Library花费|Anti-cancer Compound Library溶解度|Anti-cancer Compound Library购买|Anti-cancer Compound Library制造商|Anti-cancer Compound Library查找购买|Anti-cancer Compound Library订单|Anti-cancer Compound Library mouse|Anti-cancer Compound Library chemical structure|Anti-cancer Compound Library分子量|Anti-cancer Compound Library molecular weight|Anti-cancer Compound Library数据表|Anti-cancer Compound Library supplier|Anti-cancer Compound Library体外|Anti-cancer Compound Library细胞系|Anti-cancer Compound Library concentration|Anti-cancer Compound Library nmr|Anti-cancer Compound Library体内|Anti-cancer Compound Library clinical trial|Anti-cancer Compound Library cell assay|Anti-cancer Compound Library screening|Anti-cancer Compound Library high throughput|buy Anticancer Compound Library|Anticancer Compound Library半抑制浓度|Anticancer Compound Library价格|Anticancer Compound Library花费|Anticancer Compound Library溶解度|Anticancer Compound Library购买|Anticancer Compound Library制造商|Anticancer Compound Library查找购买|Anticancer Compound Library订单|Anticancer Compound Library chemical structure|Anticancer Compound Library数据表|Anticancer Compound Library supplier|Anticancer Compound Library体外|Anticancer Compound Library细胞系|Anticancer Compound Library concentration|Anticancer Compound Library clinical trial|Anticancer Compound Library cell assay|Anticancer Compound Library screening|Anticancer Compound Library high throughput|Anti-cancer Compound high throughput screening| 根据第一部分结果,选用G226较敏感细胞株MDA-MB-231和MCF-7探究G226诱导自噬与凋亡的能力。流式细胞术结合Western Blot发现G226能够剂量依赖和时间依赖地诱导肿瘤细胞发生凋亡,并且这种凋亡能够被Caspase抑制剂所逆转。G226诱导的细胞凋亡主要通过死亡受体通路,G226能够激活Caspase-8,以及下游Caspase-3/7和Caspase-9,引起Bid切割,导致线粒体膜电位改变,诱导肿瘤细胞发生凋亡。但该化合物对线粒体通路重要调节蛋白Bax, Nutlin-3体内 Bcl-2和Bcl-xl的表达则无影响。免疫荧光结合Western Blot技术进一步发现G226同样也能诱导肿瘤细胞发生自噬,并且自噬抑制剂3-MA和溶酶体抑制剂CQ在阻断自噬发生的同时,能够逆转G226诱导的凋亡。为了探究自噬与凋亡的关系,我们采用免疫荧光技术荧光共定位发现G226能够诱导Caspase-8与p62和LC3相互作用形成复合体。利用siRNA技术分别沉默LC3和p62,发现均能一定程度逆转G226诱导的Caspase-8和Caspase-3/7的切割与激活,同时沉默LC3也能部分逆转细胞凋亡的发生,表明LC3和p62是G226诱导Caspase的激活和细胞凋亡所必需的。但是沉默p62并不能阻滞G226诱导肿瘤细胞凋亡的发生。

第二节G226抗肿瘤作用不完全依赖于其对TopoⅡ的抑制。 采用DNA拓扑异构酶介导的supercoiled pBR322DNA解旋反应和kDNA去连环反应证实G226能够特异性抑制Topo Ⅱ的活性,且分子水平上G226靶向抑制Topo Ⅱ的作用强于阳性药依托泊甙(etoposide, VP16)。同时,中性单细胞凝胶电泳实验、Western Blot技术和流式细胞术发现G22还能够诱导DNA损伤、细胞凋亡和细胞G1期阻滞。随后我们采用Topo Ⅱα亚基低表达、Topo Ⅱβ亚基缺失的HL-60/MX2和HL-60细胞模型,比较分析G226对两株细胞的作用差异。在相同条件下,G226在两株细胞株中均能诱导DNA双链断裂、诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖,且作用强度类似。在增殖抑制试验中,G226对HL-60/MX2的耐药因子(RF)仅为3.5,同样条件下Topo Ⅱ毒剂VP16和ADR则发生明显耐药,耐药因子分别为86.9和26.4,而Topo Ⅰ抑制剂CPT和SN38耐药因子分别为1.6和1。以上结果表明G226诱导的DNA损伤、细胞凋亡及死亡并不完全依赖于其对TopoⅡ的抑制。 第三节G226影响多个Hsp90客户蛋白表达 Western Blot检测细胞周期调控相关蛋白变化,结果显示,G226引起细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4和CDK6以及DNA损伤修复通路Chkl蛋白的表达显著下调,使细胞不同通过G1期检测点和损伤修复,这可能是G226引起细胞G1期阻滞的原因。CDK4、CDK6和Chkl均为Hsp90的客户蛋白,此外G226作用后还可下调Akt,Raf、Her2、Met以及EGFR等多个Hsp90的客户蛋白,与Hsp90抑制剂AUY922作用相应细胞的结果相一致。此外,G226还能和大多数Hsp90抑制剂一样,在导致其客户蛋白减少的同时,也会导致热休克蛋白Hsp70反馈性上升。这些结果强烈提示G226可能靶向抑制Hsp90。但在用荧光偏振试验探究G226是否能在分子水平与Hsp90结合抑制其活性时,发现10μmol/LG226作用后抑制率仅为23.

Possible mechanisms include over-production of beta-amyloid peptide(Aβ).OBJECTIVE: Because Aβ is over-produced in the APP/PS1 double-transgenic mouse, the presentstudy focused on mechanisms of increased ischemic damage due to mutant APP and PS1 genes bymeasuring oxidative stress, mitochondrial function, and calcium homeostasis.DESIGN, TIME AND SETTING: The non-randomized, controlled, in vivo and in vitro experimentswere performed at the Medical Research Center, Second Clinical College, Jinan University betweenMay and October 2008.MATERIALS: Male APP transgenic mice carrying the mutant 695swe gene

and female PS1transgenic mice carrying the mutant 什么 Leu235Pro gene were donated from the University of HongKong. SHSY5Y human neuroblastoma cells were purchased from ATCC (Manassas, VA, USA), andAβ_(1-42) was obtained from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).METHODS: APP transgenic mice were mated with PS1 transgenic mice to produce APP/PS1double-transgenic mice and wildtype littermates mice. The

photothrombotic stroke model wasinduced in six APP/PS1 double-transgenic and 6 wildtype littermates mice. 已经 SHSY5Y humanneuroblastoma cells were cultured in vitro, and were divided into 4 groups: Aβ group, cells wereexposed to 5 μmol/L Aβ for 24 hours; oxygen-glucose deprivation (OGD) group, cells were exposedto OGD for 1 hour after treatment with sterile, ultra-pure water for 24 hours; OGD+Aβ group, cellswere exposed to OGD and Aβ for 1 hour after treatment with 5 μmol/L Aβ for 24 hours; sham controlgroup: cells were exposed to sterile, ultra-pure water for 25 hours. OGD was achieved by exposingthe cells to glucose-free DMEM and placing the cells in an anaerobic chamber flushed with 5% CO_2and 95%

N_2 (v/v) at 37 ℃ for 1 hour.MAIN OUTCOME MEASURES: TTC staining was used to measure infarct volume 7 days afterphotothrombotic stroke. Cell viability was evaluated using the MTT kit. Opening of the mitochondrialpermeability transition pore, intracellular concentration of superoxide anion, and calcium after OGDwere detected with fluorescence intensity of calcein-AM, hydroethidine, and 并且 fluo-3/AM.RESULTS: At 7 days after stroke, total infarct volume and cortical infarct volume were significantlygreater in the APP/PS1 transgenic mice compared with the wildtype littermates mice (P < 0.01). Aβ,OGD, and Aβ + OGD significantly decreased cell viability and increased fluorescence intensity ofhydroethidine and fluo-3/AM (P < 0.01 ). Compared with the Aβ or OGD group, Aβ + OGDsignificantly decreased cell viability (P < 0.01) and significantly increased fluorescence intensity ofcalcein-AM, hydroethidine, and fluo-3/AM (P < 0.01 or P < 0.05).CONCLUSION: The APP/PS1 double-transgenic mice were more vulnerable to ischemia.