CD44v6是CD44v的一种拼接变异体，其表达能改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成与功能，从而有助于肿瘤细胞获得转移潜能。 生存素(Survivin)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins, IAP)基因家族的重要成员，是作用最强的凋亡抑制因子。Survivin具有抑制细胞凋亡、参与细胞周期调控作用，且与肿瘤细胞的分化增殖、血管selleck HPLC控制形成及浸润转移密切相关。 恶性肿瘤的特征是无限增殖。增殖细胞核蛋白（Ki67）是近年来研究较多的反映肿瘤增殖活性的蛋白。Ki67的表达能可靠而迅速地反映恶性肿瘤增殖率，与肿瘤的增殖、浸润、转移潜能和预后密切相关。 吲哚美辛(Indomethacin,IN)作为非甾体抗炎药(NSAIDs)，具有消炎、解热镇痛等作用。其对肺癌移植瘤的抑制作用及GABA receptor drugs其机制国内外报道较少，联用应用COX-2抑制剂是否可增强化疗药物的细胞毒性作用尚不明确。本研究旨在探讨吲哚美辛对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用及其机制的研究和Survivin、MMP-2、CD44v6和Ki67表达的影响，以探讨肺癌浸润转移的分子机制。 方法: 1.将人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型，随机分为四组：对照组、吲哚美辛组GSK1349572、奥沙利铂组、吲哚美辛和奥沙利铂联合用药组。给药42天后，处死裸鼠，取出移植瘤组织，免疫组织化学检测MMP-2、CD44v6和Survivin的表达，荧光实时定量PCR法检测肿瘤组织MMP-2、CD44v6和Survivin mRNA的表达。 2.将人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型，随机分为四组：对照组、吲哚美辛一组（1mg/kg/d），吲哚美辛二组（2.5mg/kg/d），吲哚美辛三组（4mg/kg/d）。

二、利用平板克隆形成实验检测PARP1抑制对卵巢癌细胞的生长抑制作用。三、利用流式细胞术检测PARP1抑制对卵巢癌细胞ROS水平变化的影响。四、利用平板克隆形成实验检测PARP1抑制剂和NAC单独及联合处理对卵巢癌细胞生长的抑制作用。五、利用免疫荧光和Western blot方法检测PARP1抑制后,卵巢癌细胞γ-H2AX的焦点形成及蛋白表达情况。六、利用Real-time LY2109761浓度PCR检测PARP1抑制后卵巢癌细胞氧化损伤相关基因GPX1、GPX3、PRDX1、NOX4等的表达。[实验结果]一、PARP1在卵巢癌细胞A2780、HEY、SKOV3、 HO8910、HO8910PM和OVCAR3中高表达,而在正常输卵管上皮细胞FTE-187中低表达。PARP1在卵巢癌组织中同样高表达。二、PJ-34对卵巢癌细胞A2780、HE什么Y、H08910具有明显的增殖抑制作用,而对正常输卵管上皮细胞FTE-187影响较小。三、PJ-34诱导A2780、HO8910、HEY、SKOV3等卵巢癌细胞ROS水平升高。PARP1表达沉默的A2780细胞ROS水平同样升高。四、PARP1功能缺陷的卵巢癌细胞对H202和MTH1抑制剂更敏感。抗氧化剂NAC处理卵巢癌细胞A2780可以拯救PJ-3PCI-32765细胞系4对卵巢癌细胞的增殖抑制作用,说明PJ-34对癌细胞的生长抑制作用是通过升高ROS介导的。五、PJ-34处理卵巢癌细胞A2780可以诱导DNA双链断裂,当PJ-34和NAC联合处理后可以降低DNA双链断裂,说明DNA双链断裂是由ROS升高所引起的。六、部分卵巢癌细胞,如A2780、HO8910,经PJ-34处理后,GPX1表达下调。[结论]PARP1在卵巢癌细胞中普遍高表达。PARP1通过降低氧化压力对卵巢癌细胞发挥保护作用。

结论 1.人雄激素抵抗性前列腺癌细胞株PC3不表达INPP4B。 2.转染INPP4B基因能够对PC3细胞发挥抗肿瘤作用。 3. PARP抑制剂单独作用于PC3细胞能够发挥抗肿瘤作用。 4.转染INPP4B基因联合PARP抑制剂在PC3细胞能够发挥协同抗肿瘤功能,有希望成为激素抵抗型前列腺癌联合生物治疗的靶点。
[摘要]目的：研究4-氨基selleck screening library-1,8-萘二胺(4-ANI)对人肝癌HepG2田胞株体外的放射增敏作用并探讨其可能存在的周期作用机制。方法：使用DMEM体外培养人肝癌HepG2细胞株,采用CCK-8试剂盒测定不同浓度4-ANI(0、2.5、5、7.5、10、20、30μM)作用人肝癌HepG2细胞株12h、24h、48h后的增殖情况,绘制细胞存还有活率曲线,选用较低细胞毒性药物浓度进行后续增敏实验。通过细胞克隆形成实验,分别观察1Oummol/L20ummol/L4-ANI浓度组对人肝癌HepG2细胞株放疗敏感性的影响,通过多靶单击模型和线性二次模型拟合曲线计算其相关的生物学参数。采用BD FACSCALIB检测不同剂量放射后HepG2细胞周期分布变化,及不查找更多同浓度4-ANI对放射后不同时间的HepG2细胞周期的影响。结果：体外增殖实验显示总体上实验浓度范围内的4-ANI对HepG2细胞无明显药物毒性,药物作用24h后,细胞未出现明显抑制,且与对照组相比,20uM组和30uM组反而有促进细胞增殖的作用；药物作用48h后,存活曲线整体呈下降趋势,但均不低于80%；且不同浓度组在12、24、48h三个时间点的存活率均数均有统计学差异,均有P<0.05。

方法TSA和MG-132以不同浓度单独和联合作用细胞株EL4、WEHI-231、SP2/0、P3NSI,台盼蓝法、AnnexinV/propidium iodide染色、流式细胞仪观察细胞活力、周期和凋亡。Bliss法计算TSA、MG-132对各细胞株的IC_(50)值,Calcuysn软件评价药物协同效应。免疫印迹检测凋亡、周ZD1839 IC50期相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3、CyclinD1、p21的表达,观察转录因子IRF4和c-Myc表达水平。结果TSA和MG-132单独作用均可呈药物浓度依赖性地抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,两药协同效应显著。细胞凋亡相关蛋白caspase-3激活,Bax、Bcl-2表达均相对下调,阻滞于GABT-737体外_0～G_1期的细胞明显增多,CyclinD1表达水平下降,p21水平显著上升。结论TSA和MG-132单独作用细胞株WEHI-231、EL4、SP2/0、P3NSI,呈药物浓度依赖性地抑制细胞增殖、激活caspase-3诱导细胞凋亡,两药合用呈显著协同效应。同时,两药单独或联合作用均能致细胞G_1期阻Antidiabetic Compound Library滞。
目的探讨糖原合成酶激酶3β(glycogen syntheses kinase 3β,GSK-3β)在结肠癌细胞对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼和胰岛素样生长因子1型受体(insulin-like growth factor receptor-1,IGFR-1)抑制剂AG1024反应性中的作用。

以上结果说明Namalwa细胞株比较Daudi细胞株对常用的淋巴瘤治疗药物阿霉素存在一定程度的耐药。 5、阿霉素联合Velcade对Namalwa细胞株生长抑制和凋亡的影响 Namalwa细胞株对不同浓度的阿霉素较Daudi细胞显示一定程度的耐药，我们观察新型抗肿瘤药蛋白酶体抑制剂Velcade对这种耐药的拮抗GDC-0941研究购买作用。将Velcade15nM加入不同浓度阿霉素(0、5、10、20、30、50ng／ml)培养48小时对细胞生长的抑制率分别为26％、42％、41.3％、64.1％、82％、88.2％，显著高于单药阿霉素的抑制率0、2.87％、4.9％、28.2％、39.2％、58.3％(P＜0.0购买抑制剂5)；单药阿霉素浓度50ng／ml时的凋亡率为23.9％，单药Velcade浓度15nM时的凋亡率分为59.8％，与Velcade联合用药后为75.9％，Velcade与阿霉素联合Velcade的凋亡百分率显著高于单药阿霉素，两者比较也具有统计学差异性(P＜0.01)。上述结果说明VeRuxolitiniblcade能够克服Namalwa细胞株对阿霉素的耐药。 6、单药阿霉素、Velcade和阿霉素联合Velcade对IRF4表达的影响 为进一步研究Namalwa细胞株耐药和Velcade克服耐药与IRF4表达的关系，选择单药阿霉素50ng／ml、Velcade15nM以及两种药物联合作用Namalwa细胞株12、24、48、72小时后IRF4基因和蛋白表达的变化。

第五部分抗脑衰胶囊的质量控制方法研究 目的:建立一种测定抗脑衰胶囊中40种化学成分的HPLC-ESI-MS/MS方法,并用于抗脑衰胶囊的质量控制。 方法:色谱柱为Agilent C18柱,流动相为0.1%甲酸水-甲醇,梯度洗脱。采用串联四极杆线性离子阱质谱仪,电喷雾离子源(ESI),正负离子扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测,并采用所建立的方法对10批抗脑衰胶囊进行Selleckchem AZD2281分析。 结果:所有的标准曲线在线性范围内线性关系良好(r2≥0.9986),仪器精密度、日内和日间精密度的相对标准偏差(RSD)均分别小于1.4%、1.8%和2.8%。回收率范围为96.5~110.0%,RSD小于3.3%。 结论:该法专属性强、灵敏度高、结果准确可靠,可用于抗脑衰胶囊中多种化学成分含量的同时测定,为保证抗脑衰胶囊的质量提供了化selleck学分析方法。
目的:探讨Cyclin D1(CCND1)A870G基因多态性与云南地区非小细胞肺癌的年龄、性别、吸烟状况、家族史、病理分型、病理分期和化疗疗效的关系。方法:从300例云南地区非小细胞肺癌患者和500例健康云南人的血中提取DNA,用聚合酶链反应(PCR)和限制性酶切片断长度多态性分析(RTLP)的方法对提取的DNA进行分析。采用时间χ~2检验分析各个基因型频率分布与非小细胞肺癌患者性别、年龄、病理分期等临床参数和化疗疗效的关系,并计算相对危险度的比值比(Odd Ratios,OR)及其95%可信区间值(Confidence Intervals,CI)。结果:非小细胞肺癌组与健康对照组CyclinD1(CCND1)A870G基因多态性中A和G等位基因频率分别为74.7%、81%及75.8%、80.8%,两组间分布无显著性差异(P=0.907＞0.05)。

DNA损伤修复系统作为机体抵抗各种损伤的分子基础,对于维护基因组的稳定与完整起着至关重要的作用,然而对于通过损伤DNA杀死癌细胞的放、化疗,这一过程无疑削弱了治疗效果。DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/ apyrimidinic endonuclease, APE1GDC-0199生产商)具有核酸内切酶及氧化还原双功能,是细胞放射性损伤和基因毒性药物烷化剂致伤的重要修复因子,并通过氧化还原机制调节多种转录因子的DNA结合活性及下游靶基因表达,而这些转录因子与肿瘤放化疗抵抗密切相关。因此本研究以APE1为靶点,构建人APE1 siRNA重组腺病毒载体Aselleck HPLC控制d5/F35-APE1 siRNA,研究其体内外对大肠癌细胞感染效率和对APE1基因表达的“敲除”作用,及其体内外增强大肠癌放化疗敏感性的作用及其分子机制。 研究目的 1.探讨APE1基因在大肠癌发生发展中的作用,以确证APE1为大肠癌治疗潜在的分子靶点; 2.探讨以分子量APE1为靶点的基因治疗在大肠癌治疗及放化疗增敏中的临床应用前景; 3.探讨新型嵌合型腺病毒载体Ad5/F35在大肠癌基因治疗中的临床应用前景。 研究内容和方法 1. APE1在大肠癌组织表达及其临床意义:采用免疫组化方法检测大肠癌组织APE1蛋白表达,分析APE1表达与大肠癌临床病理因素的关系,为进一步以APE1为靶点的基因治疗提供临床病理基础。

二、低浓度小檗碱对食管鳞癌细胞KYSE30和KYSE450具有明显的放射增敏作用,而对人正常成纤维细胞无放射增敏作用。 三、小檗碱预处理食管鳞癌细胞KYSE30和KYSE450,可以显著抑制DNA双链断裂(DSBs)的修复,而不影响人类正常成纤维细胞对DSBs的修复。 四、小檗碱对非同源末端连接(NHEJ)修复通路的关键蛋白Ku70、Ku86无下调作用,对同源重C59组(HR)修复通路的关键蛋白RAD51有明显下调作用。 五、小檗碱对RAD51的下调与细胞周期的改变无关。 六、小檗碱能够下调电离辐射引起的RAD51的上调。 七、小檗碱能够作用于RAD51的启动子,抑制RAD51的转录活性,从而对食管 鳞癌细胞KYSE30和KYSE450起到放射增敏作用。 八、RAD51缺失后可以对食管鳞癌细胞KYSCytoskeletal Signaling抑制剂E30和KYSE450起到放射增敏作用。 九、RAD51在食管鳞癌组织中普遍高表达。 [结论] 低浓度小檗碱可以通过显著下调DSB同源重组修复中重要分子RAD51的表达,从而对食管鳞癌细胞KYSE30、KYSE450具有显著放射增敏作用。本工作为小檗碱作为一种新型放射增敏剂用于食管癌的临床放射治疗提供了重要的科学依据。
目的:探讨曲古selleck化学菌素A(trichostatin A ,TSA)对人结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及可能的作用机制。 方法:(1)将TSA作用于结肠癌细胞系HCT-116细胞,CCK8法检测吸光度值,计算对照组和各实验组细胞的生长抑制率。(2)应用流式细胞仪(FCM)研究TSA对人结肠癌HCT-116细胞周期和凋亡的影响;(3)Western Blot检测DMTF1、CyclinD1、Bid、乙酰化H3的蛋白表达水平变化。

另外,我们还采用裸鼠移植瘤模型,将人乳腺癌细胞接种到裸鼠皮下,观察5j的抑瘤效果。结果发现5j能显著抑制肿瘤生长,且抑瘤活性显著高于阳性药SAHA。综合所有实验数据表明,5j具有开发成治疗乳腺癌的HDACi类抗肿瘤药物的潜力。 针对APNi的筛选过程类似于HDACi的筛选,评价从酶活性水平到细胞水平,再到动物水平。本研究以猪APN和硫化叶菌APN作为APNi筛选用酶,进行酶Metformin活性筛选。对筛选获得的APNi,再选择APN高表达的HL-60,ES-2细胞检测APN抑制剂的抗肿瘤细胞增殖活性,并以APN低表达的K562细胞作为对照。综合活性试验结果,研究发现虚拟筛选获得的化合物HW02能明显抑制猪氨肽酶N的活性,其抑制常数优于阳性药Bestatin。由于不同来源的APN存在结构差异,我们又设计了采用高表达APN的细胞株HL63-deazaneplanocin A化学结构0和ES-2作为APN酶源,检测其抑制活性,发现HW02的抑酶活性明显优于阳性药Bestatin。MTT试验结果表明,HW02对多种肿瘤细胞株具有抑制增殖的作用,且主要阻滞细胞于G1期,并能诱导细胞凋亡。由于APN与肿瘤细胞的侵袭密切相关,因此我们还检测了HW02对细胞侵袭的影响,并发现HW02能显著抑制细胞侵袭。综上所述,HW02可能是一个潜在的Obeticholic Acid核磁共振具有一定抗肿瘤活性的APN抑制剂。 第四部分结论 本课题基于结构生物学的药物发现为指导思想,以两类金属蛋白酶-HDACs和APN为研究靶点,以本实验室设计合成的HDAC抑制剂与APN抑制剂为研究对象,通过构建靶点蛋白人HDAC8和古菌属硫化叶菌APN,从分子水平、细胞水平和动物水平上逐步进行活性评价,筛选发现了2个HDAC抑制剂及1个APN抑制剂,并对这几个化合物进行了药效评价与机制研究,发现这几个化合物具有一定的开发潜力。

极光激酶是一类高度保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,在细胞有丝分裂过程中有着重要的作用。在哺乳动物中发现有三种极光激酶：极光激酶A,极光激酶B和极光激酶C。极光激酶A在细胞中的异常表达会导致中心体扩增,干扰极光激酶A的功能会引起中心体功能缺陷,星体微管长度缩短,不能形成纺锤体,进而影响有丝分裂。研究证实,Aurora A在大多数恶性肿瘤中时间均高表达,如乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和甲状腺癌等。因此,有针对性地抑制极光激酶A已经成为癌症治疗的一个具有吸引力的治疗发展策略,已有超过10个极光激酶抑制剂进入早期临床评估。研究发现的激光激酶抑制剂的主要活性骨架分为四个部分A-D即(A)含有1,4,5,6.四氢吡咯并[3,4-c]吡唑核心：(也许B)含有吡咯并[2,3-b]嘧啶核心： (c)含有喹啉的核心和(D)含有的2=苯胺基-二氨基嘧啶核心。基于上述我们合成了一系列二芳基吡唑苯甲酰胺类衍生物,并对其进行了生物活性性评价。实验表明,人部分化合物具有较强的抗肿瘤活性,其中化合物10e活性最强,其对HCT116和MCF.7的IC50分别为0.39±0.这个06μM和0.46±0.04μM,(阳性对照VX-680对HCT116和MCF-7的IC50分别为0.30±0.03μM和0.38±0.02μM)。体外抗Aurora-A试验表明10e具有最强的蛋白激酶抑制活性(IC50=0.16±0.03 μM)。计算机模拟对接研究表明化合物10e紧紧的嵌入到蛋白的活性结合u袋。Weston blot实验表明10e对HCT116具有良好的肿瘤抑制活性。