胃癌是最常见的恶性肿瘤之一.外科手术是本病的主要治疗方法.虽然外科手术已取得了一定进展,但对于胃癌复发明显增加的患者来说总体生存率改善甚微.尽管新药物的开发已显著提高胃癌化疗的效果,但病灶不能切除或转移性胃癌的患者预后仍较差.因此,有必要找出一些有效针对胃癌的新方法.现已证明自噬在胃癌的转化和进展扮演双重角色:自噬的激活和诱导均可导致胃癌的发生.最近,一些自噬分子靶向药物治疗胃癌进行了研究.本文综述了两种调控细胞自噬方法来互补治疗胃癌:抑制剂和诱导剂,并讨论他们如何调控自噬靶向治疗胃癌.
目的检测瘢痕癌中PI3K/AKT信号通路中PI3K,AKT及其下游靶基因Bcl-2的表达,分析该通路靶向治疗靶点及靶向治疗的可行性。方法研究对象为瘢痕癌组织,以正常皮肤表皮为对照。免疫组织化学(SP法)技术检测PI3K,AKT,Bcl-2蛋白的表达;原位杂交技术检测PI3K

mRNA,AKT mRNA的表达。结合图像分析,分别计算被检组织中所检各项指标的平均光密度和阳性面积,所有数据运用SPSS16.0软件进行统计学分析。结果 PI3K蛋白及其mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在瘢痕癌组织中呈阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。AKT蛋白及其mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在瘢痕癌组织呈强阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PI3K,AKT可能是瘢痕癌的致癌位点,实施靶向治疗的可行性存在。Bcl-2可能具有致癌位点的多样性,是否是瘢痕癌的致癌位点有待进一步探讨。
PI3K是一种脂质激酶,控制着细胞生长、增殖、迁移、存活和血管生成,以及通过激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、AKT和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)促进肿瘤发展。哺乳动物mTOR的作用靶点是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它在细胞中广泛地表达,是一种治疗癌症的靶向目标。本文将主要论述癌症细胞系PI3K-mTOR信号通路的改变,包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、肝癌等的作用机制。PI3K-mTOR是肿瘤治疗的有前途的靶向目标。多靶点抑制是肿瘤治疗最有效的方法,通过讨论临床试验中研究的PI3K-mTOR抑制剂药物,为将来临床抗肿瘤药物的研发提供新途径。
目的:观察纳米金(GNP)人耐药肝癌细胞株耐药性的逆转作用。方法:采用氯金酸柠檬酸三钠还原法制备并鉴定;分别用GNP与阿霉素(ADM)组单独或联合作用于ADM耐药的肝癌细胞株Hep

那个 G2/ADM,以未处理的Hep G2/ADM细胞为对照,用MTT法检、流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡情况;紫外分光光度计检测Hep G2/ADM细胞经ADM单独作用以及GNP与ADM联合作用后细胞内ADM浓度。结果:与对照细胞比较,ADM单独作用及GNP与ADM联合作用后,Hep Mdm2 抑制剂s G2/ADM的增殖均明显抑制、凋亡率明显升高,但后者的作用明显强于前者(均P0.05);GNP+ADM作用后,Hep G2/ADM细胞内的ADM含量较ADM单独作用后的ADM含量明显增加[(2.92±0.13)μg/L vs.(1.68±0.74)μg/L,P
目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK 3CD)基因沉默对胃癌HGC-27细胞体外增殖和迁移的影响及其可能的作用机制。方法:首先采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌HGC-27细胞中PIK

3CD基因的表达水平;然后将MSCV-PIK3CD-sh RNA重组质粒转染到HGC-27细胞中,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法鉴定PIK 3CD基因沉默效果;采用CCK-8试剂盒和Transwell小室法分别检测PIK 3CD基因沉默对胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的影响;蛋白质印迹法检测PIK3CD基因沉默后其下游相关的Akt信号通路分子的表达情况。结果:PIK3CD在胃癌HGC-27细胞中高表达。MSCV-PIK3CD-sh RNA转染入PIK3CD基因高表达的胃癌HGC-27细胞后,PIK3CD表达被明显下调(P<0.05),细胞增殖和细胞迁移能力明显降低(P<0.05)。结论:PIK3CD可能通过激活Akt信号转导通路,促进胃癌HGC-27细胞的体外增殖和迁移。
目的总结自噬及其在胃癌中的研究进展。方法检索并筛选近年来国内外发表的有关自噬与胃癌关系的文献并分别对自噬的特点、分子标志、调控因素及其在胃癌中的意义和作用进行综述。结果自噬既可促进细胞的死亡,也可延长肿瘤形成中癌细胞的存活。调控自噬的药物(包括中药)在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景,但基于自噬调控的抗肿瘤治疗效果仍取决于细胞内自噬的实际水平。结论目前对胃癌自噬现象的了解仍然知之甚少,阐明自噬现象的分子机理并通过合理调控自噬来杀伤癌细胞仍然需要更为深入的实验研究。
晚期胃癌患者能否进行二线治疗一度备受争议。近年来,越来越多的研究结果表明,对体力状况较好的晚期胃癌患者,二线治疗能够显著降低其死亡风险。所用的化疗药物主要为伊立替康或紫杉类药物。多靶点的酪氨酸激酶受体抑制剂舒尼替尼、血管内皮生长因子受体2的单克隆抗体雷莫芦单抗等靶向药物也开始崭露头角。对于晚期胃癌患者,还需要根据患者的身体状况和预后指标个体化选择治疗方案。本文通过对近几年所涉及的胃癌二线治疗方案进行总结,希望能为临床晚期胃癌的二线治疗提供参考。
The Bcl 2 inhibitor phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) pathway is frequently altered in cancer, including ovarian cancer(OC). Unfortunately, despite a sound biological rationale and encouraging activity in preclinical models, trials of first-generation inhibitors of mammalian target of rapamycin(m TOR) in OC have demonstrated negative results. The lack of patient selection as well as resistance to selective m TOR complex-1(m TORC1) inhibitors could explain the disappointing results thus far. Nonetheless, a number of novel agents are being investigated, including dual m TORC1/m TORC2, Akt, and PI3 K inhibitors.

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，其主要病理特征是：细胞内外β淀粉样蛋白(β-amyloid peptide, Aβ)的沉积和细胞内tau蛋白的高度磷酸化以及神经元的丢失。成年海马神经再生障碍与AD记忆力下降有着密切的关系。目前，用于AD治疗的胆碱酯酶抑制剂和非竞争性NMDA受体抑制剂临床疗效不佳。因此，新型药物研发需要考虑其对AD成年海马神经再生的影响。 已经取得专利的烟碱类似物ZY-1对α4β2亚型烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)具有高度的亲和力，前期研究表明，该化合物能够抑制体外特定转染α4β2nAChR细胞产生的Aβ，并且显著改善9月龄APP/PS1转基因AD模型小鼠的空间学习记忆能力。为了进一步探讨ZY-1是否具有可以作为AD治疗药物研发的潜力，我们应用细胞生物学和分子生物学等方法，研究ZY-1对成年小鼠海马神经再生的影响，并分析其可能的机制。

体外成功分离、培养成年小鼠海马神经干细胞(neural stem/progenitorcells, NSPCs)。不同浓度的ZY-1处理NSPCs7天后，CCK8实验检测ZY-1对NSPCs活力的影响，结果表明，ZY-1在0.1~5μM范围内明显增加了细胞活力，并且在1μM浓度下达到最大效应，此效应可被α4β2nAChR拮抗剂DHβE所抑制。神经球增殖实验检测ZY-1对NSPCs增殖的影响，结果显示，ZY-1增加了神经球的数目和神经球的大小，表明ZY-1促进了NSPCs的增殖能力。划痕损伤实验和Transwell迁移实验检测ZY-1对NSPCs迁移能力的影响，结果均显示，ZY-1明显促进NSPCs的迁移能力。细胞免疫荧光实验和蛋白质免疫印迹实验检测ZY-1对NSPCs分化能力的影响，结果表明，ZY-1对NSPCs向神经元或星形胶质细胞的分化能力均无影响。对其机制的探索，发现在NSPCs增殖期间ZY-1明显增加细胞内ROS水平，同时还能抑制Aβ42诱导的细胞内ROS水平。这些结果说明，在体外，ZY-1通过调节细胞内ROS水平促进成年海马神经再生。 Akt抑制剂 前期体内实验表明，对APP/PS1转基因AD模型小鼠的Aβ沉积和神经元受损等病理特征，ZY-1疗效不佳。在此基础上，我们用β-III-tubulin标记新生的神经元，免疫荧光实验观察到，AD小鼠脑内海马齿状回(dentategyrus, DG)区新生神经元数目明显减少，但是ZY-1对这种新生神经元的减少的现象也无明显改善作用。 为了分析ZY-1改善AD脑内神经再生障碍失败的原因，我们又进一步研究了AD脑内局部不良微环境对NSPCs的影响，并探索其可能的作用机制。 寡聚体Aβ42(2.5μM~10μM)处理NSPCs1天、3天和5天后，CCK-8实验表明，Aβ42呈浓度依赖性和时间依赖性的抑制细胞活力，并且Aβ42处理的神经球数目和大小也明显减少。在细胞形态方面，无论悬浮培养还是单层贴壁培养的Aβ42处理的NSPCs均显示了细胞衰老的形态。细胞免疫荧光实验和蛋白质免疫印迹实验均显示，Aβ42明显抑制了NSPCs向神经元和星形胶质细胞的分化能力。此外，Aβ42还增加了NSPCs中细胞衰老的数目以及与衰老有关的p16蛋白的表达，并降低其下游分子Rb蛋白的磷酸化水平。这些结果均表明，Aβ42加速了NSPCs的衰老。

体内实验显示，与野生型相比，Aβ特异性的存在于APP/PS1转基因小鼠的皮质和海马中。在APP/PS1转基因小鼠海马DG区中，随着Aβ的逐渐沉积，NSPCs数目明显减少，至18月龄几乎消失；与同龄野生型相比，9月龄APP/PS1转基因小鼠海马DG区衰老的NSPCs数目明显增加，同时，用酶联免疫吸附实验检测衰老细胞分泌的蛋白，发现转基因小鼠海马组织中分泌的细胞因子IL-6明显增加，IGF-1水平降低。这些体内实验进一步表明，Aβ与NSPCs的衰老有关。 Selleckchem 3 MA 不 为了明确Aβ42诱导NSPCs衰老的机制，我们发现小鼠海马DG区以及体外培养的NSPCs中均存在Aβ42功能性甲酰肽受体2(formylpeptidereceptor2, FPR2)的表达。Aβ42诱导NSPCs中FPR2蛋白表达增高，其抑制剂WRW4能显著改善Aβ42诱导的NSPCs衰老表型。此外，Aβ42还增加了细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)以及p38蛋白的磷酸化水平，WRW4、抗氧化剂NAC或p38MAPK抑制剂SB203580均抑制了Aβ42诱导的氧应激及NSPCs的衰老。这些结果表明，Aβ42通过功能性FPR2受体及其下游ROS-p38MAPK信号通路加速了NSPCs的衰老。 综上所述，ZY-1在体外通过调控细胞内ROS水平促进成年海马神经再生，然而，对APP/PS1转基因小鼠AD模型的病理特征和神经再生障碍均无改善作用。对其原因分析，我们发现AD模型小鼠海马中Aβ的存在通过功能性FPR2受体及其下游ROS-p38MAPK信号通路加速了NSPCs的衰老，限制了NSPCs的功能，并最终导致神经再生障碍。 这些结果提示，神经再生对脑内局部不良微环境更为敏感，在神经再生失败的基础上刺激NSPCs增殖，疗效不佳，并可能影响药物改善学习记忆长期疗效的稳定性。治疗AD的药物研发应考虑脑内局部不良微环境对神经再生的影响。
猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）是一种组织嗜性很强的革兰氏阴性菌，感染仔猪以纤维素性胸膜肺炎和出血性坏死性肺炎为特征，具有高度传染性和致死性的呼吸系统疾病，黏附是APP定植和致病的关键因素。三聚体自转运黏附素(Trimeric Autotransporter Adhesin，TAA)是近年来新发现的一种能够造成细菌感染致病的重要毒力因子。肺泡巨噬细胞（Primaryalveolar macrophages，PAMs）是肺部最早接触病原微生物的免疫防御细胞之一，参与宿主天然性免疫和特异性免疫，细菌与PAMs的互作研究成为细菌致病机制的新热点。本实验室前期研究证实APP5b血清型L20强菌株上存在TAA，命名为Apa1，并证实其关键功能结构域为Adh。本研究针对Adh开展以下工作： 1、利用Adh基因缺失菌株研究了Adh介导APP对仔猪PAMs的致病机制。本研究体外分离猪原代肺巨噬细胞并以5b野生菌（5b WT）和Adh基因缺失菌（5bΔAdh）加以感染，比较两种细菌感染后细胞的差异，对感染早期10种炎症相关的细胞因子进行细胞因子芯片和ELISA分析，发现5b WT感染过程中唯有趋化因子IL-8的分泌显著高于5b ΔAdh（p<0.

7细胞中,淫羊藿苷对LPS的细胞毒作用具有保护作用；免疫印迹和共聚焦显微镜分析表明,淫羊藿苷预处理RAW

Microbiology抑制剂 264.7巨噬细胞后,能够减少p65核转位；淫羊藿苷能够激活PI3K/AKT信号通路。 结论：(1)淫羊藿苷具有抑制LPS诱导的小鼠肺组织炎症反应的作用；(2)淫羊藿苷能够抑制LPS诱导的小鼠肺组织炎症因子基因表达；(3)淫羊藿苷能够抑制p65从胞浆进入细胞核；(4)淫羊藿苷能够激活PI3K/AKT信号通路。
目的和意义:随着微波技术的广泛应用和信息时代的到来,人们暴露于微波辐射的机会与日俱增,各种通讯设施和医疗设备的影响尤为突出。微波的生物效应及其机制研究是目前生物电磁学的前沿课题。微波辐射具有明显的中枢神经系统损伤效应,海马是最敏感的靶区,但其致伤机制未明。线粒体结构和功能与能量代谢密切相关,也是微波辐射最早累及的靶点之一,而HIF-1α/ERK信号通路可能在微波辐射致海马神经元线粒体损伤过程中发挥重要作用。因此,研究微波辐射致海马线粒体损伤中HIF-1α/ERK信号通路的改变及意义,将为深入研究微波辐射损伤机制和防治措施提供新靶标和思路,对于平时作业人员的卫生防护和现代高科技战争中作战人员的安全保障具有重要的理论和现实意义。 材料和方法:(1)采用2.5、5和10mW/cm~2的微波辐射192只二级雄性Wistar大鼠,辐射时间为6min/次,5次/w,连续辐射1m。大鼠于辐射后6h、7d、14d、1m、2m和6m,采用Morris水迷宫检测其学习和记忆能力;通过HE、尼氏体染色和电镜观察海马组织结构和线粒体超微结构的变化;采用高效液相色谱法检测海马组织中氨基酸类神经递质含量的变化;采用Real-time PCR检测海马组织中hif-1αmRNA表达;通过Western Blot、免疫组织化学和图像分析等手段检测海马组织中HIF-1α、ERK1/2和p-ERK1/2表达。(2)采用30mW/cm~2微波辐射经NGF诱导的PC12细胞5min,通过电镜、Luminometer、多功能酶标仪、荧光显微镜等技术,观察PC12细胞线粒体结构和功能变化;采用Real-time PCR、Western Blot、免疫细胞化学和图像分析等技术,检测PC12细胞中hif-1αmRNA、HIF-1α、ERK通路分子(ERK1/2、p-ERK1/2、Raf、p-c-Raf和p-MEK1/2)、HIF-1靶基因(VEGF)、能量代谢相关基因(COXⅠ和COXⅣ)的表达变化;通过U0126和HIF-1α高表达质粒的干预等手段,研究微波辐射后ERK通路对HIF-1α的调控作用以及HIF-1α对PC12细胞线粒体功能的影响。

实验结果:(1)大鼠学习记忆能力和氨基酸类神经递质变化:辐射后7d,10mW/cm~2组大鼠平均逃避潜伏期显著长于假辐射组(P<0.05);辐射后1m,各辐射组与假辐射组相比,平均逃避潜伏期均延长(P<0.05或P<0.05或P<0.05);辐射后14d和2m,Asp和Glu含量均降低(P<0.05或P0.05);10μmol/l U0126干预2h后经30mW/cm~2微波辐射1~24h,H组ATP含量抑制率低于N组,ΔΨm于辐射后1h和6h无明显变化(P>0.05),辐射后12h和24h明显升高(P
研究目的:反复短暂的心肌缺血/再灌注可使心肌在随后持续性缺血中得到保护的现象,称为缺血预适应(ischemic PI3K抑制剂 prenconditioning,IP),IP是心肌的一种内源性保护机制。多次短暂的大强度运动诱导心肌相对缺血/再灌注也可对心肌产生IP样的保护作用,称为运动预适应(exercixe

prenconditioning,EP),EP是IP的一种特殊形式。研究表明,IP和EP的保护作用都与诱导内源性保护物质的产生有关。肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)是新发现的重要的心脏内源性保护物质,心脏产生这种物质;ADM对心脏的直接保护作用;特异性阻滞剂可阻断ADM的保护作用;外源性给予ADM可产生心脏保护作用;运动可诱导ADM的产生和释放。EP是有效的心脏保护措施,ADM是重要的心脏内源性保护物质,运动可诱导ADM的产生,EP的心脏保护作用是否是通过ADM,其保护作用的机制是什么,长期和短期EP的保护效果及其机制有什么不同,目前国内外还没有报道。因此,本研究在建立短期和长期EP模型的基础上,探讨ADM介导EP心脏保护作用及其机制,为EP心脏保护作用及其机制的研究提供新的理论和实验依据。 研究方法:本研究采用雄性SD大鼠90只,随机分为对照组(C组),异丙肾上腺素组(isoprenaline,ISO组),3天(短期)运动预适应组(3dEP组),3周(长期)运动预适应组(3wEP组),3天运动预适应+异丙肾上腺素组(3dEP+ISO组),3周运动预适应+异丙肾上腺素组(3wEP+ISO组)。3dEP组、3dEP+ISO组和3wEP组、3wEP+ISO组分别进行连续3天和3周的间歇跑台训练建立3天和3周EP动物模型。在最后一次运动结束后30min,3dEP+ISO组和3wEP+ISO组通过腹腔注射大剂量ISO,ISO组同时腹腔注射等量ISO,复制大鼠心肌缺血损伤模型。采用免疫化学发光法检测血清心肌肌钙蛋白I(cardiac BIBR 1532体内 troponin I,cTnI)的含量;用HE染色法观察心肌组织形态结构改变;用苏木素碱性复红苦味酸染色法(haematoxylin basie fuchsin picric,HBFP染色)观察心肌缺血缺氧改变;用透射电镜观察心肌细胞超微结构改变;用酶联免疫法检测血清和心肌ADM的含量;应用原位杂交技术显示心肌细胞ADM mRNA的定位表达;用免疫组织化学法显示心肌、冠状血管ADM的分布与表达;用计算机图像分析技术对心肌细胞的ADM mRNA,心肌组织、冠状血管ADM进行定量分析。 研究结果:(1)ISO组血清cTnI含量明显高于C组(p<0.05);3dEP组和3wEP组血清cTnI含量与C组相比,差异均不具有显著性;3dEP+ISO组血清cTnI含量明显高于C组(p<0.05),但明显低于ISO组(p<0.05);3wEP+ISO组血清cTnI含量与C组相比,差异不具有显著性,但明显低于ISO组(p<0.

aureus乳腺炎的感染损伤机制还不清楚,因此探索S.aureus乳腺炎发生、发展与转归的分子机制迫在眉睫。 中性粒细胞是奶牛乳腺抵御病原菌侵袭的第一道防线,它的凋亡对于控制乳腺炎症的发展和转归至关重要,在解除奶牛不良炎性反应中发挥重要作用。 为了探索奶牛S.aureus乳腺炎发生时中性粒细胞凋亡的分子机制,找到调控中性粒细胞凋亡的相关基因,本实验在体外37℃,5%C02的条件下培养从奶牛外周血中分离到的中性粒细胞,向培养基中以50：1的比例加入处于对数生长期的S.aureus,分别在共培养Oh,2h,4h,6h,8h,10h后用PITC/PI双染法通过流式细胞术检测中性粒细胞凋亡情况。最后利用基因芯片技术筛选出与中性粒细胞凋亡相关的基因,并通过qPCR对芯片结果加以验证。实验所得结果有以下几个方面：

1、中性粒细胞体外培养存活情况 体外培养的中性粒细胞的活细胞比例随着培养时间的延长不断下降,培养Oh时为100%,培养10h后活细胞比例降为80%,培养28h后降至50%。 2、S.aureus诱导中性粒细胞凋亡情况 在第Oh,2h,4h,6h,8h和10h检测中性粒细胞凋亡,实验组细胞凋亡率相比于对照组均存在极显著差异,差异值分别为3.31%,4.63%,6.77%,8.83%,8.12%和6.35%,其中诱导时间为6h时凋亡率差异最大。 3、基因芯片结果 与凋亡相关的差异表达基因共有4个,其中上调表达的为Bcl-2,它的上调表达倍数为2.4847；下调表达的有IL1-α, 那个 IL1-β和IL1-R1,下调表达倍数分别为0.2125,0.2062和0.3082。 4、qPCR验证结果 qPCR结果与芯片结果一致的有ILl-α, ILl-β和IL1-R1三个基因,而Bcl-2与芯片结果相左,表现为下调表达。 通过以上结果能得到如下结论： 1、中性粒细胞在体外环境下能够自发凋亡,存活时间较短； 2、S.aureus能够诱导体外培养的中性粒细胞凋亡,而且在10h的诱导时间内凋亡率的变化是极显著的； 3、调控中性粒细胞凋亡的基因主要为原癌基因Bcl-2, IL1及其受体。 4、芯片结果比较可信。
本研究通过建立亚急性镉染毒诱导小鼠模型,运用HE染色、透射电镜、免疫组化和Western blotting等技术方法,研究了雷帕霉素在抗镉诱导小鼠脑神经细胞氧化应激和凋亡中的保护作用,探讨雷帕霉素抑制镉诱导小鼠脑组织mTOR通路激活抗凋亡机理,为雷帕霉素在防止镉诱导的神经变性疾病提供理论依据和科学指导。结果如下： 1雷帕霉素抑制镉诱导小鼠脑神经细胞氧化应激发挥抗凋亡保护作用 36只成年健康ICR雄性小鼠,实验分为对照组(0.9%生理盐水)、雷帕霉素处理组(按7.5mg/kg体重)、2个CdCl2处理组(分别按0.5和1mg/kg体重)、2个雷帕霉素与CdCl2联合处理组,共6组。实验给药采用腹腔注射方式,实验周期11天。HE染色和透射电镜分别观察脑组织学和超微结构变化,生化分析脑组织ROS、GSH、CAT水平变化,TUNEL染色评价脑神经细胞凋亡状态。结果显示：镉染毒小鼠脑颞叶皮层出现明显的混乱,海马区细胞排列松散,脑神经元线粒体肿胀和内嵴的断裂,而雷帕霉素能够明显削弱和保护这种改变。镉诱发脑组织ROS升高以及GSH含量和CAT活性降低,这被雷帕霉素明显改善。镉诱导大脑皮层和海马组织TUNEL阳性神经细胞数量增加也被雷帕霉素显著抑制。提示雷帕霉素可以通过抑制镉诱导小鼠脑组织神经细胞氧化应激发挥抗凋亡保护作用。

PI3K Inhibitor Library 2雷帕霉素抑制镉诱导小鼠脑组织mTOR通路激活发挥抗凋亡保护作用 36只成年健康ICR雄性小鼠,实验分为对照组(0.9%生理盐水)、雷帕霉素处理组(按7.5mg/kg体重)、2个CdCl2处理组(分别按0.5和1mg/kg体重)、2个雷帕霉素与CdCl2联合处理组,共6组。实验给药采用腹腔注射方式,实验周期11天。免疫组化分析4E-BP1磷酸化表现,Western blot分析Akt、S6K1、4E-BP1和caspase-3蛋白表达。结果显示：免疫组化分析显示,镉染毒小鼠大脑皮层及海马CA1区磷酸化4E-BP1(Thr70)阳性细胞数量明显增加,Western 一般 blot分析展示镉诱导脑组织Akt、mTOR介导的S6K1和4E-BP1磷酸化以及cleaved-caspase-3增加,雷帕霉素明显地抑制这些信号分子改变。提示：雷帕霉素通过抑制镉诱导小鼠脑组织mTOR通路激活发挥抗凋亡保护作用。
内毒素休克(endotoxic shock)是临床危重病中常见的症状,可造成多器官损伤,其中以急性肺损伤(acute lung injury; ALI)常见,进一步可导致急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory

distress syndrome; ARDS)。内毒素休克所致肺损伤其发病机制复杂,治疗棘手,探讨其发病机制并进行合理有效地治疗仍是国内外研究的热点。 我们的前期研究结果表明,血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)在内毒素休克肺损伤时表达增多,可对肺起到一定的保护作用,明确其调节机制对临床制定预防措施具有重要意义。P38MAPK和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases, ERK1/2)信号通路是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein kinase, MAPK)通路中的重要通路之一,是生物体内重要的信号转导分子,在细胞分化、凋亡及炎症等过程中起重要作用。有研究表明,人肾癌细胞内ERK的激活能诱导HO-1表达增多并抵抗细胞凋亡[2],也有研究发现,体外培养的血管平滑肌细胞内受到外界刺激时,可通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路诱导HO-1表达上调。至于P38MAPK和ERKl/2信号通路是否介导内毒素休克大鼠受损肺脏HO-1的表达,目前尚未见报道。本课题拟通过建立大鼠内毒素休克肺损伤模型并给予P38MAPK和ERK1/2通路的抑制剂来探讨P38MAPK和ERK1/2信号通路对内毒素休克大鼠受损肺脏内HO-1表达的影响。 第一部分：P38MAPK信号通路在内毒素休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织中HO-1表达过程中的作用 目的探讨P38MAPK信号通路在内毒休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织中HO-1表达过程中的作用。 方法清洁级雄性SD大鼠48只,体重180g～200g,采用随机数字表法,随机分为4组(每组12只)：对照组(C组)、内毒素休克组(LS组)、内毒素休克+抑制剂组(LSS组)和抑制剂组(B组)。C组和LS组股静脉输注0.1m1DMSO(二甲亚砜),LSS组和B组股静脉P38MAPK阻断剂SB2O35805μmol/kg(溶于0.1m110%二甲基亚砜)；30min后,C组和B组分别给予0.5ml生理盐水,LS组和LSS组分别给予LPS(脂多糖)10mg/kg(溶于0.

3%)RET基因重排,包括12例RET/PTC-1和6例RET/PTC-3,癌旁正常甲状腺组织、非乳头状甲状腺癌肿瘤组织未发现RET重排,所有组织没有发现RET/PTC-2、ELKS/RET重排。RET重排在年龄＜20岁、20-40岁和≥40岁三组中的概率分别为:50%、14.6%和11.1%,年龄＜20岁的群体的RET重排的概率最高(P=0.033)。RET/PTC-1阳性的病例更容易在良性甲状腺疾病的基础上伴随乳头状甲状腺癌(P=0.021),尤其是甲状腺炎的基础上;RET/PTC-3阳性的病例具有高的甲状腺外侵犯的特点(P=0.005),同时其分期也相对较晚(P=0.007)。通过多因素的回归分析,RET重排(OR=8.703,95%CI

还有 1.690-44.818),男性(OR=3.875,95%CI 1.405-10.685),年龄(OR=0.964,95%CI 0.933-0.996),多灶性(OR=3.543,95%CI 1.333-9.416)和晚期的T分类(OR=7.318,95%CI2.910-18.400)是乳头状甲状腺癌颈侧区(Ⅱ-Ⅴ区)淋巴结转移的高危因素。 第二部分 在125例乳头状甲状腺癌中,58例发现了BRAF突变V600E(46.4%),12例为RET/PTC-1(9.6%),6例为RET/PTC-3(4.8%),6例H4/PTEN重排(4.8%),7例发现了PTEN/H4重排(5.6%)。在BRAF突变阳性的病人中,11例(19.0%)同时检测出了一种或者多种的重排,同时在RET/PTC和H4-PTEN阳性的样本中,发生另外一种突变的概率分别为38.9%(7/18)和75%(9/12),多重分子改变群体比单种分子病理改变和没有分子病理改变的病人发病年龄要轻(P=0.019)。在发生重排的四种基因里,H4基因(CCDC4),也就是形成RET/PTC-1和H4-PTEN的基因,是最常见的涉及重排的基因(17.6%,22/125)。基因重排阳性的乳头状甲状腺癌的病人的发病年龄比那些没有基因重排的病人要年轻(36.81±12.416

VS 43.53±13.890,P=0.025),在年龄小于20岁的病人中,拥有最高的基因重排的发生率(50%),在年龄≥60岁的病人中,BRAF突变是唯一一个检测出的分子改变(81.8%)。基因重排的发生率随着年龄的增大而减少,而BRAF突变的发生率随着年龄的增大而增大。重排阳性的病人比阴性的病人具有更高的淋巴结转移的可能(92.6%VS 70.4%,P=0.018)。

第三部分 根据XRCC3(AF037222)的序列,共发现了6种多态性位点6390G＞T(位于5′-UTR)、6410A＞G(dSNP登录号:rs56377012)、14242G＞A(Val165Ile)、14304C＞T、14362T＞C、18440C＞T,6410A＞G和14304C＞T的杂合度(Heterozygosity)相对较高,在正常人群均为2.5%,正常人群中野生型等位基因的基因频率均为98.8%,其它4种多态性均为少见突变。6410A＞G和14304C＞T所显示的基因频率和基因型频率符合Hardy-Weinburg AR-A014418溶解度 Equilibrium(P＞0.05)。6410A＞G的G等位基因与乳头状甲状腺癌的发病相关(基因频率在病例和对照分别为4.3%和1.3%),P值为0.033,OR值为3.580(95%CI,1.025-12.505)。由6410A＞G和14304C＞T两个多态性位点构成的单倍型(haplotype) 或者 A~(6410)C~(14304)为常见单倍型,在对照和病例中的发生率为97.5%与93.1%,与少见单倍型(A~(6410)T~(14304),G~(6410)C~(14304),G~(6410)T~(14304))相比,A~(6410)C~(14304)单倍型对乳头状甲状腺癌的发生具有明显的保护性作用,P值为0.017(OR 2.907,95%CI 1.170-7.224)。XRCC3 6410A＞G的A/G和GG型个体所患甲状腺癌组织的RET重排率高于AA型个体的RET重排发生率(25%V.S.14%),但差异没有统计学意义(P=0.335)。 结论 第一部分 本研究中中国人乳头状甲状腺癌仅存在RET/PTC-1和RET/PTC-3两种重排方式,在年龄＜20岁的病人群体,RET重排的概率是50%,明显高于其它的年龄群体;RET重排同乳头状甲状腺癌Ⅱ-Ⅴ区淋巴结密切相关,RET/PTC、男性、发病年龄早、多发病灶、晚期的T分类被证实为乳头状甲状腺癌侧颈部淋巴结转移的高危险因素,应当对RET/PTC阳性乳头状甲状腺癌的病人的侧颈部进行更详细的术前评估和术后随访。我们推测RET/PTC-1和RET/PTC-3在甲状腺癌的演进方面具有不同的作用,RET/PTC-1可能在乳头状甲状腺癌与甲状腺炎的相关性方面具有一定的作用。 第二部分 基因重排的发生率随着年龄的增大而减少,而BRAF突变的发生率随着年龄的增大而增大,是年龄≥60岁的病人中唯一被检测出的分子改变(81.

本文提出,肿瘤是一种蛋白质组病,并根据肿瘤比较蛋白质组、表达蛋白质组、功能蛋白质组和结构蛋白质组研究进展,从肿瘤发生发展过程中蛋白质(组)表达水平及状态、蛋白质翻译后修饰、蛋白质相互作用及网络调控等三个方面进行阐述.该观点的提出,将为肿瘤发病机制的研究开辟新的领域,为肿瘤的诊断(如生物标志物筛选)和筛选(如药物新靶标)提供新的思路,具有重要的科学意义和临床应用价值.
由于心肌坏死后局部组织缺血、缺氧,引起氧化应激和炎性反应,致使移植干细胞的生存和分化能力受到一定影响。胰岛素样生长因子-1、肝细胞生长因子、骨形态发生蛋白-2等细胞因子可通过与其受体结合,激活P13-K/Akt信号转导途径,从而介导干细胞在移植微环境中的存活,有利于移植干细胞向心肌分化。
目的:拟通过调节糖原合酶激酶3(GSK-3)活性,检测蛋白磷酸酯酶2A催化亚基去甲基化水平(dmL309-PP2AC)以及相关分子的变化,进一步阐明GSK-3调节PP2A活性的分子机制。方法:将选用小鼠神经瘤细胞株,给予PI3-K抑制剂
Objective:We

previously reported that inhibition of mitochondrial permeability transition pore(mPTP) is involved in the neuroprotection induced by sevoflurane postconditioning(SPost).However, the upstream mechanisms remain unclear.In the present study,we examined the hypothesis that the neuroprot…
Glycogen synthase kinase 3b (GSK-3b) is a serine/threonine protein kinase involved in the modulation of the inflammatory response. Dysregulation 或者 of GSK-3b has been implicated in the pathogenesis of several diseases including sepsis. Here, we investigate the effects of two chemically distinct

GSK…
Diabetes and oxidative stress:preventive role of physical exercise Mustafa Atalay, Niku Oksala, Jani Lappalainen, Osmo Hanninen, Chandan K. Sen ( University of Ruopio, Finland. Mustafa. [email protected]) Oxidative stress, an imbalance between the generation of reactive oxygen species and antioxidant…
Effect of ganoderma lucidum spores 更多 powder on TNF – α and ET -1 in the hippocampi of epilepsy rat Shuang Zhao ,Shu – qiu Wang ,Sheng – chang Zhang ,Xiao – ru Ma ,Ting Zhang ( Postgraduate of Grade 2003,Jiamusi University, Jiamusi 154007, China; Department of Pathophysiology Basic Medical College o…
目的:探讨2型糖尿病对舒芬太尼后处理及GSK-3β蛋白抑制剂SB216763减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的影响方法:健康雄性清洁级SD大鼠80只,体重1 80-200g,随机分为糖尿病造模组和正常组各40只。2型糖尿病模型的制备采用高脂饲料喂养诱导胰岛素抵抗加一次性腹腔注射链脲佐菌素35mg/kg的方法。正常组大鼠予以普通大鼠饲料,各饲养8周后进入实验,各随机分为4组,共8组(n=6):非糖尿病假手术组(NDM-S组)、非糖尿病缺血再灌注组(NDM-IR组)、非糖尿病舒芬后处理组(NDM-SP组)、非糖尿病SB216763处理组(NDM-SB组)、糖尿病假手术组(DM-S组)、糖尿病缺血再灌…
Introduction Myocardial ischemia reperfusion injury can be reduced by several interventions,including

并且 ischemic preconditioning(IPC) and volatile anesthetic preconditioning,in animal hearts and human hearts. However,recent studies have indicted that several pathological conditions,such as
目的:最近的研究表明TRIM家族蛋白MG53在心肌保护中发挥重要作用,但是很少的研究探讨MG53在七氟烷后处理抗心肌缺血再灌注损伤中的作用。本文试图研究MG53在大鼠I/R模型中七氟烷后处理心肌保护作用中的作用和机制。方法:应用Langendorff系统,离体大鼠心脏经历40min全心缺血120min再灌注,后处理组在复灌开始10给予2.5%七氟烷后处理。记录左心室血流动力学参数,测量心肌梗死面积,心肌MG53,Akt,p-Akt,ERK1/2,p-ERK1/2),GSK3β,p-GSK3β表达量。结果:相比对照组,七氟烷后处理组血流动力学明显改善,梗死面积明显减少,并且这种变化可以被LY29…
Traumatic brain injury (TBI) is often caused by the accidents to damage the brain. TBI may induce glutamate excitotoxicity and lead to neuronal and glial cell death. In this study, we investigated the mechanism of cell death during secondary damage of TBI and the protective effect of resveratrol. No…

通过缺氧6h/复氧6h处理能够成功建立离体心肌细胞缺氧-复氧损伤模型。 2.不同浓度的PNU282987后处理均可抑制离体心肌细胞缺氧-复氧损伤过程中的炎症反应,并产生明显的心肌保护作用。PNU282987后处理的炎症反应抑制作用存在有剂量-效应关系,但是其心肌保护作用存在“封顶效应”,在30μM时达到最强。 3.PNU282987后处理和TDZD-8后处理均能通过抑制缺氧-复氧心肌细胞GSK-3β活性而显著降低炎症反应和mPTP开放程度,并产生明显的心肌保护效应。并且TDZD-8后处理的心肌保护作用强于PNU282987后处理。 4.mPTP开放状态能显著影响缺氧-复氧心肌细胞损伤的程度,并主动参与炎症反应。表现为mPTP开放抑制剂CSA能显著降低心肌细胞缺氧-复氧过程中的炎症反应,维持心肌细胞线粒体膜电位,产生明显的心肌保护作用；而mPTP开放剂ATR则能显著上调此过程中的炎症反应水平,降低心肌细胞线粒体膜电位,显著加重缺氧-复氧心肌细胞的损伤程度。 5.mPTP过度开放能显著拮抗PNU282987后处理的心肌保护作用及其下调炎症细胞因子IL-6和TNF-a释放的作用。同时,PNU282987后处理亦能显著拮抗mPTP开放剂ATR后处理加重心肌细胞损伤及其上调IL-6和TNF-a释放的作用。

获悉更多 6.除了抑制mPTP开放介导的细胞凋亡途径之外,PNU282987后处理还存在其它的抗细胞凋亡途径。
第一部分GSK-3β在戊四氮慢性点燃大鼠海马表达与活性的动态变化 目的：在戊四氮慢性点燃大鼠过程中动态观察GSK-3β, P-GSK-3β(ser9), P-tau(ser396)蛋白在海马的表达变化,探讨GSK-3β在苔藓纤维出芽过程中的作用。 方法：6-8周健康雄性SD大鼠,共135只,将大鼠随机分为实验组(n=90)和对照组(n=45)。实验组予以每日腹腔注射戊四氮亚惊厥剂量(30mg/kg)建立慢性点燃颞叶癫痫模型,对照组每日予以腹腔注射等量的生理盐水。根据首次腹腔注射后第3天,1周,2周,4周和6周将实验组和对照组随机分为5个亚组。每个亚组再分为三个小组,实验组每小组6只大鼠,对照组每小组3只大鼠,分别进行：(1)

Timm染色观察海马苔藓纤维出芽并评分；(2) Western blot方法检测GSK-3β,及其非活性形式P-GSK-3p (ser9)和下游磷酸化底物P-tau 确认细节 (ser396)三个指标在海马的总蛋白量的表达变化。(3)免疫组化方法分别检测GSK-3β、P-GSK-3β(ser9)、P-tau (ser396)在海马各区域的表达及分布变化。 结果： 1.实验组大鼠模型点燃成功率为94.7%,死亡率2.1%,所有达到完全点燃标准的大鼠均可见到反复自发痫性发作。对照组大鼠行为正常,始终未见痫性发作。 2.对照组大鼠CA3区在各时间点均未见明显出芽,实验组大鼠CA3区在点燃过程的第3天即观察到少量苔藓纤维出芽,并呈进行性增加。与对照组相应时间点比较差异有统计学意义(P0.05),其余各时间点之间比较均有差异(P0.05)。 3. Western blot结果显示：在戊四氮慢性点燃大鼠过程中,GSK-3β表达成升高趋势,2周时达高峰,6周时恢复至正常水平。其非活性形式P-GSK-3β HDAC activation (ser9)表达变化与之相反,两周时表达下调至低峰,6周时恢复至正常水平。除6周组外,实验组各时间点与对照组相比具有差异(P0.05),其余各时间点之间比较均有差异(P<0.05),DG区次之(P0.05)。 结论： 1.GSK-3β可能通过调节tau磷酸化水平参与苔藓纤维出芽的过程。 2.GSK-3β在CA3区的表达及活性变化可能较DG区变化在颞叶癫痫形成过程中更为重要。 第二部分干预GSK-3β对苔藓纤维出芽及颞叶癫痫的形成与发展的影响 目的：探讨在大鼠慢性点燃过程中干预GSK-3β活性对tau蛋白磷酸化水平及苔藓纤维出芽的影响。

方法：68周清洁级健康雄性SD大鼠,共180只,将大鼠随机分为PTZ+SB216763干预组(n=90)和PTZ+DMSO实验组(n=90)。两组大鼠均予以每日腹腔注射戊四氮亚惊厥剂量(30mg/kg)建立慢性点燃颞叶癫痫模型,同时分别在点燃过程的第2天,第4天,第6天予以干预组大鼠侧脑室注射GSK-3β的选择性抑制剂SB216763,实验组大鼠予以侧脑室注射空白对照DMSO溶剂(经生理盐水稀释)。将每组大鼠划分为3天,1周,2周,4周,6周5个亚组,每组18只大鼠,每个亚组再分为3各小组,每个小组6只大鼠,分别进行：(1)Timm染色观察两组大鼠海马苔藓纤维出芽差异；(2) Western blot方法分别检测两组大鼠GSK-3β, P-GSK-3β (ser9)和P-tau (ser396)在海马的总蛋白量变化差异。(3)免疫组化方法进一步检测上述三个指标在海马各区域的表达及分布变化差异。 结果：1.干预组大鼠经戊四氮亚惊厥剂量重复刺激出现痫性发作的时间(第8天)晚于实验组(第5天)。实验组大鼠平均点燃时间为21.4±1.8天,而干预组大鼠平均点燃时间为26.4±1.2天。干预组大鼠模型点燃成功率仅82.6%,而实验组成功率为91.4%。以上各差异均存在统计学意义(P0.05)。但与第一部分实验组的死亡率2.1%相比,均存在显著差异(P<0.01)。实验组达完全点燃标准的大鼠均可观察到反复Ⅱ-Ⅳ级的自发发作,而干预组大鼠仅有50%的大鼠可观察到Ⅱ-Ⅲ级的自发发作,差异显著(P0.05)。 3.western blot及免疫组化结果均显示GSK-3β的总表达量在两组大鼠的表达变化趋势一致,均在3天时表达上调,2周时达高峰,4周时开始下降,除了4周干预组GSK-3β表达较实验组明显下调外(P0.05)。 与实验组相比,干预组大鼠P-GSK-3β(ser9)的表达在3天组出现显著升高(P0.05),两组间各时间点比较仍存在统计学差异(P<0.05),尤其是3天组的表达量甚至低于正常的大鼠,与实验组相比存在显著差异(P0.