5、增殖细胞核抗原(PCNA)及Bax蛋白的表达水平。结果:与N组相比,HH组和HD组细胞活性增加(P<0.01),PCNA蛋白表达上调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显降低(P0.05);较之HD组,HU组、HS组及HA组细胞活性降低(P<0.05或P<0.01),PCNA蛋白表达下调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显增加,差异均显著(P<0.01),其中以HA组各指标变化最明显。结论:钾离子通道Kv1.5对低氧高二氧化碳性大鼠PASMCs增殖、凋亡的调节可能与MAPK通路的激活有关。
目的观察知母皂苷对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及探讨其作用机制。方法小鼠小脑颗粒细胞与腹腔巨噬细胞联合培养及腹腔巨噬细胞单独培养,损伤组加入Aβ25-35(20μmol/L),保护组同时加入不同质量浓度知母皂苷(10、30、100μmol/L)。联合培养的细胞通过免疫组化染色观察微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达和测定乳酸脱氢酶(LDH)。单独培养的巨噬细胞用ELISA法和Griess法分别测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO)。Western

不 blot检测巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平。结果知母皂苷组可使MAP-2表达阳性的小脑颗粒细胞数目较Aβ25-35组明显增加,LDH漏出量减少;巨噬细胞培养液中IL-1β和NO生成量减少以及巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平明显降低。SB203580也能抑制Aβ25-35引起的IL-1β和NO生成量增加。结论 知母皂苷通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK通路,使IL-1β和NO表达水平降低,从而对小脑颗粒细胞起到保护作用。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinases,MAPKs)是广泛表达的丝氨酸/酪氨酸激酶,在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用。MAPKs有3个主要家族:ERKs、JNKs和p38 MAPKs。近年来发现,p38信号通路是MAPK通路的一重要分支,它在炎症细胞、应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用。随着研究的深入,p38 MAPK可以作为神经元和胶质细胞中研究疼痛的靶标,很可能为疼痛性疾病的治疗提供一个良好的前景。
目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)中的作用及其机制。方法:用坐骨神经部分损伤(spared nerve iniury,SNI)和腰5前根切断(lumbar 5 ventral root transection,L5 VRT)方法复制大鼠病理性疼痛模型,观察外源性IL-1β对正常大鼠及病理性疼痛模型大鼠脊髓背角C纤维诱发电位的影响,并且检测p38 不 MAPK(p38 mitogen-activatedprotein kinase)和NF-κB(nuclear factor-kappa B)信号通路在其中的作用。结果:500μg/L IL-1β对正常大鼠C纤维介导的基本突触传递和高频刺激诱导的LTP都没有影响,而5μg/L的IL-1β可以在神经病理性疼痛模型的大鼠上诱导出LTP。预先用p38 MAPK或NF-κB的抑制剂(SB203580或PDTC)可以完全阻断IL-1β诱导的LTP。结论:外源性IL-1β可诱导神经病理性疼痛大鼠脊髓背角C纤维诱发电位的LTP。38 MAPK和NF-κB信号通路可能参与这一过程。
目的观察胆汁酸G-蛋白偶联受体(G selleck化学 protein-coupled receptor for bile acids,TGR5)被齐墩果酸(oleanolicacid,OA)激活后对RAW264.7细胞白细胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)转录的影响及其机制的探讨。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR法检测OA作用不同时间RAW264.7细胞和原代枯否细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达;并进一步分析在RAW264.7细胞中加入3种不同信号通路的抑制剂对上述3种炎症因子mRNA表达的影响。OA作用RAW264.7细胞和原代枯否细胞不同时间后,Western blot分析p38 MAPK的磷酸化水平。结果 OA刺激RAW264.7细胞6、12、24 h后,IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达明显升高。OA作用于分离的原代枯否细胞3 h和6 h后,也可观察到相同的结果。p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可以明显地抑制OA诱导的RAW264.7细胞内IL-1β、TNF-α和IL-6

mRNA的表达,但PKA和NF-κB的抑制剂无此作用。RAW264.7细胞和原代枯否细胞经OA刺激后,p38 MAPK磷酸化水平明显增强。结论 TGR5可能通过活化p38 MAPK磷酸化诱导炎症细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,提示TGR5在无其他刺激因素作用下,具有诱导炎症因子表达的作用。
目的通过抑制MAPK通路活化,观察其对脓毒症大鼠组织和血清诱导型一氧化氮合成酶(iN-OS)及一氧化氮(NO)合成的影响以及循环变化.方法大鼠脓毒症模型采用经典的盲肠结扎穿孔术(cecalligation puncture,CLP),将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、CLP脓毒症组和SB203580治疗组.采集组织和血清并测定组织iNOSmRNA表达水平,NO检测试剂盒(酶法)检测组织和血清NO含量;同时分别监测上述各时间点的脉搏和平均动脉压.结果与正常组大鼠相比,CLP后各时间点脓毒症大鼠肺、血管和血清iNOS mRNA、NO含量均升高明显;而MAP下降明显、脉搏明显升高(P<0.05,P<0.01).治疗组与CLP组相应时间点相比,iNOSmRNA表达在肺和血管多个时间点降低;而肺和血管及血清NO含量下降;血压和脉搏均显著好转(P<0.05,P
Objective To investigate the neuroprotective effects and the mechanism of this protection of raloxifene (RLX), a selective estrogen receptor modulator. Methods MTT assay and flow cytometry with annexin V-FITC/PI staining were performed to evaluate the neuroprotective effects of RLX on Ab25-35 -induced toxicity.

1μM以下。 3)以新引入的结构交叉改变Block B和Block D单元，得到的目标产物以97的活性最好，c-Met IC50为8.6nM，并且97对Met介导的细胞增殖具有明显的抑制作用(90.5%/1μM)。 4)继续以97为改造基础设计了α-烷基取代的哌啶酮类化合物。同时通过骨架迁越设计合成了异黄酮类化合物。该类化合物的生物活性评价正在进行中。

通过上述的活性评价对该类化合物进行了初步的构效关系评价：对Block A苯环的取代对活性的影响较弱；Block B片段以吡啶酮和α-氯代哌啶酮结构最优，环状连接臂结构均优于柔性直链结构片段；Block B与Block C之间连接的酰胺氢是活性必需的；Block D片段以喹啉基取代最优，要强于3-氯-2-氨基吡啶取代。 2、Combretastatin A-4类似物的设计、合成与生物活性研究 本部分在设计合成了CombretastatinA-4(CA-4)的11个类似物，分别以N-甲基化的酰胺键、马来酰胺环和2H-1,4-二硫嗪为连接臂。对所合成的CA-4类似物选用胰腺癌细胞株(BxPC3)、乳腺癌细胞株(MCF-7)、肺癌细胞株(A549)和结肠癌细胞株(HCT116)进行了细胞毒活性评价，发现活性较CA-4的活性下降明显，只有化合物226的细胞毒性保持在纳摩尔级别，但是相比CA-4活性降低了50倍以上。
1目的 肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤,近年来肺癌的发病率和病死率均迅速上升,其中男性患者中肺癌的死亡率已居首位。其中非小细胞肺癌的发病率在所有肺癌中比例最高。肺癌的发生及发展与肿瘤相关基因的异常表达存在着密切的关系。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian selleck产品 Alectinib target of rapamycin,mTOR)作为一种高度保守的蛋白激酶,可以通过整合生长因子和营养信号来调节肿瘤细胞生长,是肿瘤生物调节中的关键性基因。目前mTOR已成为肿瘤治疗的生物靶点。

慢病毒介导的RNA干扰是目前公认的最有效的基因沉默手段之一。本文拟通过利用慢病毒介导的RNA干扰技术,以非小细胞肺癌细胞A549为研究对象,以mTOR为目的靶基因。利用MTT、流式细胞术、克隆形成、Transwell及裸鼠体内试验等技术,分别在体外及体内环境中探讨降低mTOR的表达对A549细胞生物学行为的影响。此外通过检测P70S6K, MT1-MMP, HIF-1a, VEGFA, cyclinD1等基因的表达变化,进一步分析mTOR调控肿瘤生物学功能的分子机制。本研究旨在通过以上实验探讨mTOR在肺癌细胞中的作用及其机理,同时为mTOR作为治疗性靶基因在临床方面的应用、为肺癌的基因治疗、基因药物的研制提供必要的实验依据。

2方法 2.1根据mTOR编码区基因序列,设计合成4条shRNA,并克隆到慢病毒表达载体。转染A549细胞后,应用RT-PCR及western blot检测其干扰效果,并确定干扰效率最好的一条shRNA。最后分别将其包装成带有GFP标签及Puro抗性基因的慢病毒颗粒。 2.2体外实验中,将带有GFP绿色荧光标签的慢病毒感染A549细胞。应用MTT、细胞生长曲线、克隆形成、流式细胞术检测A549细胞的增殖和凋亡能力；应用transwell检测细胞侵袭能力；利用western www.selleckchem.cn/products/Decitabine.html blot检测mTOR的表达降低对P70S6K,MT1-MMP, HIF-1a, VEGFA, cyclinD1蛋白表达的影响。 2.3体内实验中,利用带有Puro抗性基因的慢病毒感染A549细胞并获得持续表达mTOR shRNA及对照病毒的稳定细胞株。将获得的稳定细胞株扩增并以107/只的细胞浓度接种裸鼠。接种后对裸鼠的体重及肿瘤形成进行监测,分析mTOR的低表达对A549细胞成瘤性的影响。 2.4统计学处理：应用SPSS16.0统计分析软件进行统计学处理,计量资料采用均数士标准差(X±s)表示,多样本均数比较采用方差分析,两两比较采用LSD比较,率的比较采用X2检验等进行统计学处理,显著性检验水准取a=0.05。 3结果3.1成功将四条mTOR shRNA克隆至pSIHl-H1-copGFP慢病毒克隆载体,分别为Sh-mTOR-6506, Sh-mTOR-3266, Sh-mTOR-4995, Sh-mTOR-6216。分别转染A549细胞后,通过RT-PCR及western blot验证mTOR的表达水平后发现,Sh-mTOR-6216对A549细胞中mTOR的抑制率可达70%以上,干扰效率明显高于其他干扰组及对照载体组。然后成功包装含有该shRNA序列的带有GFP荧光标记的慢病毒lenti-GFP-mTOR及Puro抗性基因的慢病毒lenti-Puro-mTOR,分别用于以下的体外实验及体内试验。 3.2体外实验中,利用lenti-GFP-mTOR慢病毒感染A549细胞。感染后48h,MTT检测结果显示：空细胞组,对照慢病毒组及lenti-GFP-mTOR组在570nm的吸光度值分别为：0.687±0.103,0.667±0.037,0.356±0.

1μmol/L,而动物饲养试验中的最佳剂量为10mg/kg,同时得出dbcAMP调控脂肪沉积的可能机理是:适量添加dbcAMP能促进脂肪中β-AR mRNA表达量的增加,dbcAMP与β-AR结合,激活Gs蛋白,进而活化AC,促使细胞内cAMP含量增加,而后激活PKA,活化的PKA释放催化亚基去催化细胞内其它蛋白质(如CREB或HSL)的磷酸化,HSL浓度的提高可使线粒体进入解偶联呼吸状态,底物氧化耗能增加,最终使脂肪分解代谢增强;也可通过降低FAS、LPL的活性和PPARγ2、A-FABP

有 mRNA的表达,抑制脂肪细胞分化,降低脂肪沉积;还可通过降低INSR数量,减少INS与受体结合的机会,抑制INS对体脂沉积的促进作用。得出dbcAMP调控蛋白质沉积的可能机理是:通过GPCR-AC-cAMP-PKA途径,调节转录因子CREB的活性,加速了基因的转录和表达,从而使蛋白质合成增多;通过增加骨骼肌内结构蛋白α-actin和MHC的mRNA表达量以及生肌决定因子MyoD的表达,提高蛋白质的合成量,同时降低肌抑素Myostatin mRNA表达,减少蛋白质的降解量;还可通过GH/IGF-1途径,IGF-1 mRNA表达量的提高,能直接诱导骨骼肌细胞分化,促进DNA合成,从而导致蛋白质合成增加。
MAPK级联途径是存在于真核生物中进化上保守的信号通路,在细胞信号的转换和放大过程中起重要作用。MAPK级联途径由三个成员组成,分别是MAPK、MAPKK (MAPK kinase)及MAPKKK(MAPKK kinase),此三个信号组分按照MAPKKK-MAPKK-MAPK的方式依次磷酸化将外源信号级联放大向下传递。植物中的MAPK通常分为四组,即A, B, TGF-beta抑制剂 C, D。关于A, B组MAPK的报道较多,研究较为详细。关于C组MAPK的分析较为欠缺。但近年研究发现,C组MAPK同样参与介导环境胁迫及信号分子(如ABA, H_2O_2等)的传递。由于不同物种中C组MAPK编码基因相继报道,所以有理由推测不同物种间C组MAPK调控的信号转导通路可能存在某些相似性。玉米作为一种重要的禾本科粮食作物,其C组MAPK基因迄今未见报道。ABA,H2O2是植物逆境信号转导中重要的信号分子,

C组MAPK是否介导这两种信号的传递?与抗氧化系统关系如何?这一问题亟待回答。本研究从玉米栽培种鲁单50幼苗中分离到一个C组MAPK基因,命名为ZmMPK7,对其序列特征、表达模式、以及过表达转基因烟草的抗逆生理功能做了初步研究。主要结果如下: 1. GenBank中玉米MAPK基因信息的收集及整理 根据拟南芥20个MAPK的基因序列,逐一在GenBank中比对,共得到39条玉米序列的信息。其中许多基因序列存在重复提交的现象。经分析后共保留下12条特异的基因全序列,它们都具有植物MAPK的序列特征,分属于四组,即A, B, C, D。其中C,D组成员占大多数,由此推测C,D组MAPK的多样性可能与其介导信号转导的特异性有关。

2.玉米C组MAPK基因ZmMPK7的分离及序列分析 根据玉米MAPK基因信息分析结果,设计特异引物从玉米幼苗中特异性扩增DNA片段。该扩增片段包含一个1113bp的ORF,编码370个氨基酸,预测蛋白质分子量为42.5kD,命名为ZmMPK7。序列分析显示,ZmMPK7包含11个植物MAPK保守的Ser/Thr蛋白激酶亚区以及一个TEY基序。进化树分析显示其与水稻OsMSRMK3,拟南芥ATMPK1、ATMPK2、ATMPK7、ATMPK14,烟草NtNTF3及豌豆PsMPK2的同源性较高,属于C组MAPK。 3. ZmMPK7的表达分析 为了研究ZmMPK7对不同胁迫刺激的响应模式,我们首先进行Northern blot分析。ZmMPK7具有较高的本底水平表达,100μM ABA或1.5 mM H_2O_2明显诱导该基因的表达,而PEG-6000及4oC低温处理未能检测到该基因的诱导表达。ABA及H2O2对该基因的诱导呈现不同的时间效应,并且依赖于Ca~(2+)的存在。Imidazole、Tiron及DMTU为ROS效应剂,其中Imidazole是NADPH oxidase的抑制剂,而Tiron及DMTU是细胞内源ROS淬灭剂。使用以上药剂预处理玉米幼苗,半定量RT-PCR分析显示不同程度地抑制了ABA对ZmMPK7的诱导表达。正常生长状态下的玉米幼苗,ZmMPK7的本底表达呈现稳态水平,未检测到节律周期性。 4.过表达ZmMPK7的转基因烟草在渗透胁迫下抗氧化能力增强 为进一步研究ZmMPK7在介导ABA、H2O2信号转导过程中的详细功能,本研究构建该基因的正义过表达载体,农杆菌介导法转化烟草,挑取T3代纯合阳性转基因株系及野生型烟草进行生理分析。发现渗透胁迫下转基因烟草各株系内H2O2及丙二醛(MDA)积累量较野生型烟草少。以PEG-6000模拟渗透胁迫处理烟草,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的总酶活在转基因烟草和野生型烟草中未检测到明显差异,而过表达ZmMPK7显著增强了转基因烟草的过氧化物酶(POD)及抗坏血酸过氧化物酶(APX)总酶活。转基因烟草各株系的总抗坏血酸(AsA)及脱氢抗坏血酸(DAsA)含量明显高于野生型烟草。根据以上证据有理由推测过表达ZmMPK7的转基因烟草抗氧化系统得以改善,渗透胁迫下受到的氧化伤害较轻。此外,利用不同浓度的甲基紫精(MV)模拟氧化胁迫,分析烟草幼苗生长受到的影响。结果显示转基因各株系在较高或较低浓度的MV处理培养基中,均表现为较好的长势。该证据再次说明过表达ZmMPK7的转基因烟草在耐受氧化胁迫方面的优势。 而且 5. ZmMPK7定位于细胞核 生物信息学软件预测ZmMPK7细胞核内定位的几率较高,瞬时转化ZmMPK7-GFP于洋葱表皮细胞的实验验证了该推测,即ZmMPK7为细胞核定位。 6.

脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)在激光扫描共聚焦显微镜下观察大鼠海马CA1区神经元的凋亡情况。 4.透射电镜技术观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构。 5.免疫胶体金染色技术透射电镜下观察大鼠海马CA1区神经元内细胞色素C(Cyt

c)的分布情况。 6.激光扫描共聚焦显微镜技术及Western blot法观察大鼠海马CA1区神经元内及其线粒体内Akt、GSK3β激酶的磷酸化水平,及Cyt c、Bax等蛋白的亚细胞分布。 7.利用JC-1染色法检测大鼠海马CA1区神经元线粒体膜电位的变化。 结果: 1.延迟性脑缺血后处理具有抗缺血性神经元损伤作用,该保护作用能够被Akt上游激酶抑制剂LY294002部分抑制(如Fig. 2所示)。激光扫描共聚焦显微镜结果显示,与I/R组相比,PostC组大鼠海马CA1区及皮质区存活神经元数量明显增加,凋亡神经元数量明显减少;PostC+LY294002组大鼠海马CA1区及皮质区存活神经元数量明显低于PostC组,而凋亡神经元的数量明显高于PostC组,大致同I/R组。延迟性脑缺血后处理抑制全脑缺血大鼠海马CA1区及皮质区神经元的凋亡,促进神经元的生存,且该神经元保护作用能够被LY294002抑制。 此网站 2.延迟性脑缺血后处理抑制全脑缺血大鼠海马CA1神经元线粒体损伤,LY294002能够部分抑制后处理的保护作用;PostC能够抑制缺血再灌注引起的血脑屏障损伤及神经元的脱髓鞘样改变。结果显示(Fig. 3A),sham组神经元的核膜清晰,线粒体结构完整,双层膜结构清晰可见,嵴排列紧密;I/R组神经元核膜模糊,线粒体结构破坏严重,水肿,内室高度扩张,呈空泡,状嵴断裂,外膜呈多边形样改变;PostC组神经元核膜清楚,线粒体损伤轻微,水肿及嵴断裂不明显;PostC+Vehicle组同PostC组,结果中未显示;PostC+LY294002组大致同I/R组。此外(Fig. 3B所示),I/R组血管缝隙连接损伤明显,连接处电子密度不均匀,PostC组缝隙连接规则紧密,电子致密度均一,损伤不明显。再次(Fig. 3C所示),I/R组髓鞘改变明显,疏松状,且髓鞘内线粒体高度空泡变性;而PostC组髓鞘结构完好,其内线粒体结构正常。 3.延迟性脑缺血后处理诱导线粒体内促生存激酶Akt及GSK3β磷酸化水平升高(Fig. 4)。Western Blot结果显示,PostC组再灌注30 min、6 h、1 d时间点大鼠海马CA1区神经元线粒体内p-Akt及p-GSK3β水平明显升高。激光扫描共聚焦显微镜观察结果同Western Blot结果。 4.延迟性的脑缺血后处理能够抑制全脑缺血大鼠海马CA1区神经元线粒体膜电位的下降,LY294002能够抑制此改变(Fig. 5)。表现sham组红色荧光明显,而绿色荧光几乎看不到,神经元存活良好;I/R组绿色荧光强,大部分神经元线粒体膜电位降低,即神经元处于凋亡状态;PostC组红色荧光较强,线粒体膜电位处于较高水平,神经元生存;PostC Saracatinib体外 + LY294002组大致同I/R组。 5.延迟性脑缺血后处理抑制全脑缺血大鼠海马CA1区神经元线粒体内Cyt c释放到胞浆。Western Blot结果(Fig. 6A)显示,与I/R组相比,PostC组胞浆内Cyt

c水平在再灌注30 min、6 h、1 d均显著降低;而总蛋白内I/R组与PostC组水平在个时间点变化不明显。其次(Fig. 6B),免疫胶体金电镜结果显示,I/R组线粒体损伤明显,基质水肿,嵴断裂崩解,呈高度空泡状,金颗粒弥漫分布,胞浆内分布较多;而PostC组线粒体结构完好,嵴排列紧密整齐,双层膜结构少见,金颗粒集中分布在线粒体,胞浆内胶体金颗粒分布较少。免疫荧光染色结果(Fig. 6C)示PostC组与I/R组相比Cyt c与COXⅣ(线粒体内参)共定位明显,进一步说明PostC能够抑制Cyt c从线粒体释放到胞浆。 6.延迟性脑缺血后处理抑制全脑缺血大鼠海马CA1区神经元胞浆内Bax转位到线粒体(Fig. 7)。表现为与I/R组相比,PostC组胞浆内Bax表达水平在再灌注30 min、6 h、1 d时间点均显著升高,而在相同时间点线粒体内Bax表达情况恰好与胞浆内呈相反变化趋势,而总蛋白内Bax的表达在各组各个时间点的变化则不明显。 7. Akt上游激酶(PI3K)抑制剂LY294002抑制延迟性脑缺血后处理诱导的线粒体内p-Akt,p-GSK3β水平升高;并对抗延迟性脑缺血后处理对神经元线粒体内Cyt c释放及胞浆内Bax转位的抑制作用(Fig. 8)。 结论: 延迟性脑缺血后处理通过激活线粒体内Akt/GSK3β信号转导通路,抑制全脑缺血大鼠海马CA1区神经元线粒体膜电位的下降,进而阻止线粒体膜通透性转换孔的开放,抵御缺血再灌注引起的线粒体内Cyt c释放到胞浆及胞浆内Bax转位到线粒体,最终达到抗缺血性神经元凋亡的作用。
目的观察舒芬太尼后处理对犬心肌缺血再灌注损伤的保护作用以及对细胞凋亡caspase-3表达的影响，并初步探讨其机制是否与JAK2-STAT3通路有关。

方法健康家犬24只，体重10-15kg，随机分为4组（n=6）：①假手术组(S组)：丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎；②缺血再灌注组(I/R组)：结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注120min；③舒芬太尼后处理组(PO组)：在再灌注前5min静脉输注舒芬太尼（0.6μg/kg），余同IR组；④舒芬太尼后处理+JAK2激酶抑制剂AG490组(AG组)：操作同舒芬太尼后处理组，但在给予舒芬太尼前静脉输注JAK2抑制剂AG490（1mg/kg）。于再灌注120min后取出心肌标本，浸泡在甲醛固定液中。采用免疫组化法测定caspase-3、p-STAT3的含量；TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数（apoptosis 无 index，AI）；HE染色观察光镜下的心肌病理变化。 结果 1.心肌组织凋亡细胞 与S组比较，I/R组、PO组、AG组凋亡指数升高（P＜0.05）；与I/R组比较，PO组、AG组凋亡指数下降（P＜0.05）；与PO组比较，AG组凋亡指数升高（P＜0.05）。 2. caspase-3及p-STAT3含量 与S组比较，I/R组、PO组、AG组caspase-3表达升高（P＜0.05）；与I/R组比较，PO组、AG组caspase-3表达下降（P＜0.05）；与PO组比较，AG组caspase-3表达升高（P＜0.05）。 与S组比较，I/R组、PO组、AG组p-STAT3表达升高（P＜0.05）；与I/R组比较，PO组p-STAT3表达升高（P＜0.05）；与PO组比较，AG组p-STAT3表达减少（P＜0.05）。 3.光镜下病理观察 与S组相比，I/R组、PO组、AG组心肌都有不同程度的损伤。PO组、AG组损伤程度较I/R组明显减轻，但AG组变化较PO组明显。结论 1.舒芬太尼后处理可以抑制心肌细胞凋亡，对MIRI具有保护作用； 2.

Periostin,a 90 – kDa ECM protein,is a key regulator of cardiac fibrosis,and its expression is significantly higher in failing

hearts.We determined the modulatory effect of Ang Ⅱ on peri…
Objective Bone morphogenic protein(BMP4) stimulates superoxide production and exerts proinflammatory effects in the endothelium.BMP4 also mediates endothelial dysfunction in hypertension.However, 点击此处 the role of BMP4 in endothelial dysfunction of type 2 diabetes remains unknown.The present study aims…
目的探讨黄芪皂苷Ⅱ(ASⅡ)逆转人肝癌细胞Bel-7402/FU耐药与MAPK信号转导通路的关系,为肝癌临床化疗方案的制定及耐药逆转研究提供理论基础。方法采用Western-blot检测ASⅡ作用于耐药细胞Bel-7402/FU后p糖蛋白(PgP)的表达和ERK,JNK,P38的磷酸化情况。ERK/MAPK的抑制剂PD98059,JNK/MAPK的抑制剂SP600125,P38/MAPK的抑制剂SB202190分别作用于Bel-7402/FU后,RT-PCR和免疫组化分别检测mdrl基因和p-gp蛋白的表达情况,流式细胞仪检测RH123在细胞内蓄积和贮留情况。阻断剂处理后再加入5-氟尿嘧啶(5…
目的:血管平滑肌细胞(vascular

Selleck HKI 272 smooth muscle cells,VSMCs)增殖、凋亡、迁移异常和细胞外基质增加是血管重建(remodeling)主要表现之一。在体情况下,VSMCs主要承载由脉动血压产生的周期性张应变的作用。本研究拟观察周期性张应变在调控VSMCs增殖和迁移中的作用并探讨其可能的信号通路。方法:应用FX-4000T细胞张应变加载系统,对体外培养大鼠胸主动脉VSMCs施加5%(正常)和15%(异常增高)牵张幅度的周期性张应变,加载频率为1.25 Hz,时间为24 h,以未加载的细胞为静态对照组。应用Transwell检测细胞迁移能力;BrdU ELISA检…
Objective Glucocorticoids(Gc),main stress hormone,has been shown to modulate synaptic plasticity and the process of learning and memory in hippocampus.Gc exerts long-term effects on central nervous system(CNS) through classical mechanism.There is increasing evidence for rapid Gc actions triggered…
Objective Migration of astrocytes can be found in brain development and neurodegeneration.A large number of studies have shown that protein kinases are involved in the migration of astrocytes.However,the roles 而且 of important protein phosphatases(PP),such as PP2A,in astrocytes migration

are still un…
Aim To investigate the role of acid-sensing ion channel1a(ASIC1a) in acid-induced autophagy of rat articular chondrocytes and its possible mechanism in vitro.Methods The primary rat chondrocytes were isolated,purified and cultured in vitro.In experiment 1,the acidosis model was induced using cult…
目的:研究抵抗素样分子β(RELMβ)对人肾小球系膜细胞丝裂原活化蛋白激酶MAPKs通路及细胞增殖活性的影响。方法:采用慢病毒介导的过表达技术,构建过表达RELMβ基因的人肾小球系膜细胞系。WB检测人肾小球系
目的:探讨P38MAPK(mitogenactivatedprotein kinase,MAPK)抑制剂SB202190对血管性痴呆大鼠海马bcl-2、caspase-3表达及学习记忆的影响。方法:用两血管法(2VO)建立血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型,将60只三月龄雄性Wistar大鼠随机分成VD组、假手术组和SB202190组。SB202190组以SB202190按2mg/Kg剂量侧脑室注射,VD组和假手术组给予等量的生理盐水,以Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆能力,免疫荧光法和蛋白印迹(Western blot)法分别观察大鼠海马区bcl-2和casp…

57、593.3、558.47μg/ml*h, CL分别为1.003、0.380、0.589(mg)/(μg/ml)/h。与CPT组相比较,偶联物组AUC约提高了两倍,消除速率CL明显降低。

针对聚轮烷载体的优势以及喜树碱的作用效果、现有剂型的缺点等方面,本实验合成了以聚轮烷为载体的聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系,并从偶联物的表征,含量、溶解度以及体外释放度的测定、体内外抗肿瘤试验的等方面进行了研究。研究结果表明,聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系有良好的溶解度,大大改善了喜树碱难溶的缺点；体外释放结果表明其具有良好的缓释效果,体内外抗肿瘤试验表明,偶联物对肿瘤细胞及实体瘤有明显的抑制作用；生物利用度是药物制剂质量的一个重要指标,静脉注射偶联物药物代谢动力学研究结果表明,偶联物的AUC大大提高,半衰期延长,有效促进了药物的生物利用度。
研究背景与目的 哪里 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我国南方省份及东南亚高发的一种恶性肿瘤,具有明显的种族聚集性和地域性。其发生是一个多阶段、多途径、多机制的过程。流行病学调查显示,鼻咽癌的发生涉及到遗传倾向性和环境致癌因素,很可能是遗传易感性个体接受了致癌物的作用而发生的。EB病毒(EBV)、化学致癌物和胚性击中(即遗传因素或自发突变)构成NPC的主要病因,而发病阶段至少在两个以上。各种环境因素、EBV感染、遗传和表遗传学的改变导致瘤基因过表达及抑瘤基因表达下调或缺失,经过癌前病变,最终发生鼻咽癌。 肿瘤的生成涉及多种基因和基因以外的变化,任何单独一种基因的改变不足以致瘤,多种基因变化的积累才能引起控制细胞生长和分化的机制紊乱,使细胞的生长失控而瘤变。在这些基因的变化中,最常发生两类基因的异常变化,即瘤基因及肿瘤抑制基因。鼻咽癌的生成同样涉及多基因的表达改变。在过去几十年中,虽然我们对于鼻咽癌发生的分子基础认识已经有了很大的提高,但这些认识还是远远不能完全揭示鼻咽癌的发病机理。因此,鼻咽癌相关新基因的发现和研究仍将有助于进一步揭示鼻咽癌的发病机理。 NESG1基因(Genbank AF094758),官方名为CCDC19(NM_012337.1),是本课题组姚开泰教授指导的博士生黎众魁于1999年利用mRNA差异显示法,从人正常鼻咽上皮和软腭口腔上皮中筛选,并结合3′-RACE和5′-RACE技术,分别扩增出长约1.4kb和0.7kb的片段(其中包含了一段174bp的重叠产物以确认扩增的特异性),拼接后发现的一个全长约1850bp连续的cDNA序列。该基因位于1q22。预测其编码框长1161bp,编码386个氨基酸,分子量为46252Da,蛋白质等电点为9.99,SOSUI和PSORTⅡ网上预测其为可溶性核蛋白。BLAST比对发现,NESG1的cDNA序列与胎儿肺组织cDNA文库和Stratagene肺癌cDNA文库中的两个EST序列同源。多组织(包括鼻咽粘膜、气管、食管、大脑、心脏、膀胱、肝脏、肺脏、胃、肾脏、胸腺和大肠)Northern杂交显示,该基因特异性的表达于鼻咽和气管纤毛柱状上皮。

确认细节 本课题在此研究基础上,对NESG1基因进行重新克隆测序分析及功能鉴定,并寻找NESG1基因相关的信号转导通路,探讨该基因在鼻咽癌中的作用机制,为进一步阐明鼻咽癌发病机理提供参考。 研究内容与方法 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息学分析 对NESG1基因进行了重新克隆、测序分析并对其序列进行修正,重新预测编码框。对新校正序列进行生物信息学分析。 2. NESG1基因在鼻咽癌中表达水平检测 (1).NESG1基因mRNA表达水平 利用RT-PCR和Real-time PCR检测NESG1 mRNA在鼻咽癌细胞、鼻咽癌组织与非癌鼻咽组织中的表达情况；原位杂交检测NESG1基因的mRNA表达定位。 (2).NESG1兔抗人多克隆抗体制备及NESG1蛋白表达 构建pGEX-4T-1-NESG1-GST原核融合表达载体。IPTG诱导NESG1-GST基因融合表达。利用GST抗体纯化融合蛋白用于免疫大白兔,约100天后取兔血上清,并亲和纯化,最后获得所需的NESG1多克隆抗体。利用免疫组化和Western blot检测NESG1蛋白在鼻咽癌组织与非癌鼻咽组织中的表达情况。利用免疫组化检测鼻咽外多组织中NESG1的表达分布。 3. NESG1基因在鼻咽癌中的功能初步研究 (1).NESG1过表达对鼻咽癌细胞5-8F生物学特性的影响 构建与增强型绿色荧光蛋白融合表达的NESG1慢病毒载体,利用293FT细胞包装成成熟的慢病毒颗粒,感染具有高成瘤和高转移能力的鼻咽癌细胞5-8F。96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞,扩大培养,建立稳定过表达NESG1的鼻咽癌细胞株,以空载体同时进行病毒包装及感染鼻咽癌细胞5-8F,获得对照细胞株。利用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验等检测NESG1基因在细胞水平对细胞生长、细胞周期、迁移及侵袭能力的影响；检测稳定过表达NESG1的鼻咽癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的改变。

(2).抑制NESG1表达对鼻咽癌细胞5-8F生物学特性的影响 和 构建靶向NESG1的shRNA慢病毒干扰载体,稳定干扰过表达NESG1基因的鼻咽癌细胞,利用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验等观察NESG1表达抑制后细胞生长、迁移及侵袭能力的变化。进一步探讨NESG1基因在鼻咽癌细胞中的基本功能。 4. NESG1基因介导的分子基础初步研究 (1).应用Affymetrix全基因组芯片检测NESG1基因稳定导入前后对鼻咽癌细胞基因表达的影响,寻找差异表达基因 (2).利用生物信息学的方法,分析基因芯片差异表达基因介导的信号通路 (3).NESG1抑制细胞周期进展的初步分子机制 由于过表达的NESG1能阻滞细胞周期由G1向S期转化,因此,NESG1参与抑制了细胞周期的进展。基于基因芯片的数据,我们利用荧光定量RT-PCR和Western blot验证了S期相关的几个重要基因CCNDl、CCNAl、CDK4、p21、CDK2、CDC2的表达,初步探讨了NESG1基因抑制细胞周期进展的机制。 结果 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息学分析 (1).NESG1基因的序列修正 最近,我们对NESG1基因进行重新克隆并测序分析时发现,测序结果与原提呈的AF094758(NM_012337.

05或P
目的对近年TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成的相关研究作一综述。方法广泛查阅国内外近年有关TGF-β1/Smad3信号转导通路及与创伤后瘢痕形成的文献,并进行综述。结果 TGF-β1是纤维化疾病的重要影响因子,通过TGF-β1/Smad3信号通路转导产生其生物学效应。该途径受多种因子调控并在细胞及分子水平与其他信号通路串话。该途径参与创伤后早期炎性反应、创面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干预转导途径的各个环节,可以影响纤维化及细胞外基质沉着的进程。结论 TGF-β1/Smad3信号转导途径是影响创伤后瘢痕形成及细胞外基质沉着的重要途径。对该途径进行深入研究,可为临床促进创面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理论基础。
目的设计合成2,4,5-三芳基-1H-吡唑-3(2H)-酮类化合物,并研究其对ALK5信号通路、COX-1和COX-2信号通路的抑制活性,以期发现新型的ALK5或COX抑制剂。方法关键中间体3-氧代-2,3-芳基丙酸甲酯(6)可以由两种方法制备:一是由芳基醛(1)与芳基乙酸甲酯(2)Aldol缩合后经Swern氧化的方法得到;二是通过芳基酰氯(5)与芳基乙酸甲酯的钠盐(4)直接缩合得到。化合物6与4-氰基苯肼(7)缩合得到4-(3,4-二芳基-5-氧代吡唑啉-1-基)苯腈(8),将化合物8的氰基水解为酰氨基得到化合物(9)。应用基于细胞的TGF-Smad2检测评价化合物的ALK5抑制活性;采用化学发光法测试化合物对COX1和COX2的抑制活性;采用MTT法检测化合物的细胞毒性。结果与结论该文所合成的化合物和中间体均为新化合物,所有目标化合物和大部分中间体的结构经过了核磁与质谱的确证,其中目标化合物18个。多个化合物对ALK5信号通路、COX信号通路显示具有很好的抑制活性,并且细胞毒性较小。
青光眼是一种眼科常见疾病,根据发病情况可分为急性和慢性2种。其主要表现为眼压持续或间断性升高的水平超过眼球耐受程度,从而导致特征性的视神经损害、视野缺损,最终可致失明。青光眼滤过手术是目前药物治疗无效患
目的:探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1(transforming

所以 获悉更多 growth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法:本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组(5只)、模型组(18只)和扶正化瘀方组(14只)。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体(TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ)、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂(SB-431542)组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白(α-smooth

www.selleckchem.cn/products/BKM-120.html muscle actin,α-SMA)和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果:体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论:扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。
目的:探讨SB431542对肝星状细胞T6(HSC T6)Smad4蛋白细胞内转位及表达的影响.方法:HSCT6细胞贴壁后,在细胞培养瓶中加入SB43154210mol/L培养2h,用免疫荧光法结合激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4蛋白细胞内转位.将HSCT6细胞分成3组:空白对照组、SB4315421mol/L组、SB43154210mol/L组,培养24h后分别提取细胞浆蛋白及核蛋白,以Western blot法检测Smad4蛋白表达水平变化.结果:SB43154210mol/L作用2h后,未出现Smad4蛋白向细胞核内转位.HSC T6细胞贴壁后被SB4315421mol/L、SB43154210mol/L作用24h后,细胞浆内Smad4蛋白表达量较空白对照组减少,呈剂量依赖型;而细胞核内Smad4蛋白表达量较空白对照组增多.结论:SB431542通过抑制大鼠HSC活化过程中Smad4蛋白在细胞内的核转位,可起到阻断TGF-1/Smad通路的细胞内信号转导的作用.
目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.

不同浓度BMP2对OCCM30内sclerostin表达的影响目的：探索不同浓度BMP2对OCCM30内sclerostin (SOST)表达的影响。方法：应用含有BMP2浓度分别为Ong/ml,50ng/ml,100ng/ml的细胞培养液培养细胞3d、5d、

此网站 7d, RT-PCR检测SOSTmRNA水平,Western blot检测sclerostin蛋白水平。结果：RT-PCR以及Western blot结果均显示,BMP2可以上调SOST的表达,且具有浓度依赖性。随着时间的增加,SOST表达随之增强。结论：在OCCM-30中BMP2正向调控SOST表达,且随着BMP2孵育时间的增加,SOST表达也随之增强。2.不同浓度dorsomorphin, PD98059, SB202190对OCCM30增殖的影响目的：探索不同浓度dorsomorphin, PD98059, SB202190对OCCM30增殖的影响,为后续实验筛选最佳阻断剂浓度。方法：应用含不同浓度dorsomorphin, PD98059, SB202190的细胞培养液培养成牙骨质细胞株OCCM30,浓度梯度均设置为2μM、4μM、 CCK检测细胞增殖。结果：各个浓度的dorsomorphin对OCCM30的增殖均表现出抑制,dorsomorphin浓度越高抑制作用越明显。各个浓度的SB202190以及PD98059对OCCM30的增殖在24h、48h未表现出明显抑制,而在72h表现出不同程度的抑制作用,且阻断剂浓度越高,抑制作用越明显。3.BMP2相关通路对成牙骨质细胞中SOST表达变化的影响目的：探索BMP2相关通路(Smad通路／MAPK通路/ERK1/2通路)对成牙骨质细胞中SOST表达变化的影响。方法：将实验分为A、B、C、D、E五组,A组为空白对照,不加BMP2不加阻断剂;B组加BMP2；C组加BMP2+dorsomorphin;D组加BMP2+SB202190,E组加BMP2+PD98059,分别于第3d、5d收样进行检测,RT-PCR检测各组SOSTmRNA表达,

Western Blot检测sclerostin表达。结果：相对于BMP2组,BMP2+2μMdorsomorphin组、BMP2+10μM {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| SB202190组以及BMP2+10μM PD98059组sclerostin水平均降低,BMP2+2μMdorsomorphin组降低最多。结论：无论是阻断BMP/Smad通路、P38MAPK通路还是ERK1/2通路,sclerostin的表达均会受到抑制,阻断BMP/Smad信号通路后sclerostin表达降低程度更大。提示BMP2对OCCM30细胞中sclerostin (SOST)表达的上调作用主要由BMP/Smad信号通路介导。
目的:白藜芦醇是一种天然植物提取物,具有多种生物学功能,并对多种肿瘤有显著的抑制作用,本身无毒性作用,因此有望成为治疗和预防肿瘤的新药。本实验通过观察白藜芦醇、阿糖胞苷单独及联合对体外培养的人白血病K562细胞株的生长抑制效应、细胞周期影响及Fas/FasL、Survivin表达变化,探讨白藜芦醇与阿糖胞苷是否有联合增效作用,并对其作用机制进行初步探讨。

不 方法:以人白血病K562细胞株为研究对象,不同浓度白藜芦醇、阿糖胞苷单独及联合处理K562细胞24、48、72h后, MTT法检测细胞增殖抑制率,利用中效原理计算出各时间段内白藜芦醇、阿糖胞苷对K562细胞增殖抑制的中效浓度,以检测二者有无联合增效作用;白藜芦醇、阿糖胞苷单独及联合处理K562细胞48h后,FCM检测细胞周期分布变化;透射电镜观察细胞超微结构变化和凋亡小体形成;免疫组织化学法检测Fas、FasL蛋白表达;RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达变化。 结果:不同剂量白藜芦醇、阿糖胞苷单独作用24h、48h、72h和联合作用24h、48h对K562细胞均有生长抑制作用,在一定范围内呈剂量、时间依赖性,两种药物联合有协同增效作用。白藜芦醇作用于
研究背景:外周组织损伤所致的炎症既伴随有疼痛的产生(持续性自发痛、痛敏及触痛等)同时又有明显的红、肿、热等炎症反应。我们以往的研究发现,大鼠后足底中心皮下注射蜜蜂毒溶液不仅能产生明显的持续自发痛反应、热及机械性痛敏反应[1-5],而且在注射部位有明显的红肿等炎症发应[1-5]。已有大量的研究表明MAP(mitogen-activated protein kinase)与疼痛及炎症的发生有关,且ERK1/2和P38在组织和神经损伤诱致的疼痛和热及机械痛敏中的作用各不相同。 目的:通过观察周围局部预先给予ERK1/2、P38和MEK的抑制剂对皮下注射蜜蜂毒诱致的持续自发疼痛反应、机械性痛敏以及炎症反应,用以探讨MAPK信号转导途径在蜜蜂毒诱致的炎症与疼痛中的作用机制。这些研究可能为临床炎性疼痛治疗提供新的理论资料和思路。 材料和方法:应用蜜蜂毒(bee venom, BV)作为化学致痛剂皮下注射模型来研究MAPK在大鼠的自发痛反应、机械痛敏和炎症反应中的作用。实验采用雄性SD大鼠,体重250～300克。分别预先10分钟给予大鼠一侧后肢足底皮下注射不同剂量的ERK1/2抑制剂PD98059,P38抑制剂SB202190和MEK1/2抑制剂U0126,其后注射侧后肢足底皮下注射蜜蜂毒(0.

05,n=3)。LPS在正常氧浓度状态下以剂量依赖方式刺激腹腔巨噬细胞产生TNF-α,在低氧状态下不同剂量LPS的刺激效果没有明显区别(p＞0.05,n=3)。小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α受低氧和SB203580影响的的模式与RAW264.7相似,低氧可使SB203580的抑制能力大约降低50%。 8.小鼠在正常氧浓度环境下接受不同剂量LPS 90 min后,血清TNF-α水平与正常对照组小鼠比较均有明显升高(p＜0.05,n=3)。 在正常氧浓度和低氧环境下(10%O_2),15 mg/kg和25 mg/kg剂量的SB203580均不能降低0.5 mg/kg LPS诱导的内毒素血症小鼠血清TNF-α水平(p＞0.05,n=3)。 小鼠在注射LPS 0.5mg/kg后240 min与90 min急性期比较,血清TNF-α水平有所下降(p＜0.05,n=3),24 h基本降至正常水平。 9.小鼠接受LPS注射90 min肺组织中已经可检测到HIF-1αmRNA。Real-timePCR比较发现HIF-1αmRNA的表达水平在SB203580治疗组和对照组之间没有明显差别(p=0.34)。同时Western

blot和免疫组化染色均可检测到HIF-1α蛋白的表达。免疫组化染色显示LPS注射90 min后HIF-1α蛋白主要位于在肺间质组织中。LPS注射240 min后,免疫染色阳性的细胞数目减少。与Western blot检测结果一致,SB203580并没有影响HIF-1α蛋白的表达量。 研究结论 1.低氧可以增强p38 MAPK的活性。p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580在正常氧浓度下可以完全抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中TNF-α表达,但在低氧(0.5%O_2或氯化钴模拟低氧)状态下却失去了这种抑制能力。 以及 2.低氧影响小鼠腹腔巨噬细胞对LPS反应和SB203580的抑制效果的模式与RAW264.7细胞相似。 3.低氧可以增强TNF-α的转录活动及mRNA的稳定性。SB203580在正常氧浓度下可以抑制TNF-α的转录,但并不能影响mRNA的稳定性。 4.低氧并不影响p38 MAPK和p-p38 MAPK的表达量,而是通过增强p38的活性,增加下游底物p-MK2的表达,从而增加TNF-α的合成。 5.HIF-1α在内毒素血症模型小鼠肺组织中表达,并且其表达水平不受SB203580的影响。SB203580不能有效降低伴随低氧状态的内毒素血症小鼠血清TNF-α水平。 6.低氧可能通过HIF-1α介导TNF-α的生物合成,并且调节通路不受p38抑制剂的影响,可能与p38通路起到协同作用。 创新及意义 1.本研究阐述了低氧在脓毒症TNF-α生物合成中起重要作用,低氧可提高p38 MAPK的活性,解释了p38抑制剂SB203580在脓毒症及脓毒性休克中具有争议性的体内应用效果。 2.本研究提示HIF-1α可能参与调节TNF-α的生物合成,低氧通过HIF-1α的信号传导可能独立于p38信号通路,并且两条通路有协同作用。我们的发现为理解低氧在脓毒症和脓毒症休克病理过程中的作用提供了新视角。

3.本研究提示在脓毒症和脓毒症休克的临床治疗中,除了TNF-α的生物合成机制,低氧的伴随病理状态也是必须考虑因素之一,为脓毒症的治疗提供了新的靶点和理论依据。
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)来源于胚胎发育囊胚阶段的内细胞团,可以分化成机体三个胚层来源的所有组织细胞。自从1981年由Evans和Kaufman等建立了首个鼠ES细胞系及1998年Thomson等分离得到人ES细胞以来,ES细胞研究得到了长足发展,目前仍是生命科学研究热点之一。ES细胞的多向分化潜能使其在临床再生医学领域有巨大应用前景,然而发挥ES细胞在临床治疗方面巨大作用的前提是如何在体外扩增ES细胞,并保持其全能性。人ES细胞在体外培养时容易自发分化,因此需要将其培养在胚胎成纤维细胞上或利用添加细胞因子的条件培养基维持不分化,然而这些方法都较繁琐,不适合大规模培养,并且可能造成外源性蛋白污染。要找到一种更适合更简便的人ES细胞培养条件,首先必须要了解维持人ES细胞自我更新和多潜能性的分子机制。先前文献研究报道显示:多种因素参与调控人ES细胞自我更新,其中包括转录因子(Oct4、Nanog、Sox2等),信号通路(TGFβ信号通路、WNT信号通路、FGF和PI3K信号通路等),细胞周期调控因子,microRNA,染色体稳定性及DNA甲基化等。Oct4、Nanog、Sox2是目前研究较多的参与调控人ES细胞自我更新的转录因子,它们在人ES细胞中高表达,通过抑制人ES细胞向某一胚层分化来维持人ES细胞多潜能性,并且它们之间可相互作用形成复杂的转录调控环路,共同维持人ES细胞的多潜能性。近来研究报道除上述几个关键基因外,人ES细胞中还存在其它已知或未知基因参与其自我更新的调控过程,然而日前它们在人ES细胞中的功能及调控机制远未阐明。为了探索和揭示除Oct4、Nanog、Sox2外其它维持人ES细胞多潜能性的基因及其功能,更深入地阐明人ES细胞自我更新的复杂机制,本课题开展了人ES细胞自我更新相关基因的高通量筛选,并且进行了人ES细胞自我更新相关新基因的克隆和功能及转录调控研究。

一般 【人胚胎干细胞和拟胚体基因表达谱的初步分析】 基因芯片为高通量基因表达研究提供了一个有利工具。本研究中采用Affymetrix 此网站 Human Genome U133 Plus 2.0 Array芯片分析比较了未分化人ES细胞(H9)和分化7天的拟胚体(7-day embryoid bodies,7-day EBs)基因表达谱,检测到在人ES细胞分化形成的7-day EBs中约1100个基因表达下调大于2倍及2200个基因表达上调2倍以上,并通过real-time PCR证实了芯片结果的可靠性。在表达下调2倍及以上的基因中,包含了许多已经证实在维持人ES细胞自我更新中发挥重要作用的基因。例如:Oct4表达下调约14倍,Nanog表达下调约17倍,Sox2表达下调约2.6倍。目前已初步揭示在维持人ES细胞多潜能性过程中发挥一定作用的基因也被检测出在7-day EBs中表达显著下调。例如:TDGF1表达下调约11倍;LEFTB表达下调约42倍,DNMT3B下调约8倍等。此外,基因芯片检测结果中包含了大量未知基因(假定蛋白和EST序列),这些未知基因在人ES细胞分化时表达显著改变,但它们的完整基因序列目前仍未获得。其中两个EST序列(GenBank登录号:BF223023、BC020935)在人ES细胞中表达水平较高,尤其是BF223023在未分化人ES细胞中表达水平与Oct4和Nanog相似,而当人ES细胞分化形成EBs时其表达显著下调(19.

Thus, an ongoing, large-scale effort is underway to develop clinically active drugs that target elements of the PI3K pathway. However, conflicting data suggest that gain-of-function PIK3CA mutations may be associated with either a favorable or a poor clinical outcome, compared with the wild-type PIK3CA gene. In the current study, we performed a systematic review of breast cancer clinical studies. Upon evaluation of 2587

breast cancer cases from 12 independent studies, we showed that patients with tumors harboring a PIK3CA mutation have a better clinical outcome than those with a wild-type PIK3CA gene. Importantly, this improved prognosis may pertain only to patients with mutations in the kinase domain of p110α and to postmenopausal women with B-Raf assay estrogen receptor-positive breast cancer. We propose three potential explanations for this paradoxical observation. First, PIK3CA mutations may interfere with the metastasis process or may induce senescence, which results in a better

outcome for patients with mutated tumors. Secondly, we speculate that PIK3CA mutations may increase early tumor diagnosis by modification of the actin cytoskeleton in tumor cells. Lastly, we propose that PIK3CA mutations may be a favorable predictive factor for response to hormonal GSK2656157临床试验 therapy, giving a therapeutic advantage to these patients. Ultimately, an improved understanding of the clinical

impact of PIK3CA mutations is critical for the development 无 of optimally personalized therapeutics against breast cancer and other solid tumors. This effort will be important to prevent or explain therapeutic failures and select patients who are most likely to respond to new therapies that inhibit the PI3K pathway.
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT/PKB)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号传导通路可抑制肿瘤细胞凋亡、促进细胞生存、调节细胞周期,促进肿瘤新生血管的形成以及侵袭与转移,在肿瘤的发生、发展、治疗及转归中发挥着重要作用。而近来研究发现此信号通路与乳腺癌的关系非常密切,使之成为乳腺癌新的治疗靶点及研究热点。临床前研究已经证实,PI3K抑制剂及mTOR抑制剂通过不同的作用靶点作用于PI3K/AKT/mTOR信号传导通路上,从而达到抗癌的作用。PI3K抑制剂中有些药物只作用于PI3K靶点,有些作用于PI3K和mTOR双靶点,且现阶段的研究更倾向于进行针对不同PI3K亚型的分子靶向药物的研究,以达到对PI3K通路的抑制作用更具有针对性和特异性的目的,其在临床上的作用和疗效需要进行进一步的研究。而mTOR抑制剂针对的作用靶点是mTORC1,是PI3K/AKT/mTOR通路中开发较为完善的分子靶向药物,雷帕霉素衍生物类药物已经在乳腺癌中进行Ⅱ/Ⅲ期临床试验,且该类药物在联合乳腺癌内分泌治疗药物或人表皮生长因子受体-2(Her-2)靶向治疗药物治疗转移性乳腺癌中取得了良好的疗效。
目的设计合成一系列6-取代亚甲肼基嘧啶及三嗪衍生物,并对其体外抗肿瘤活性进行初步评价。方法以2,4,6-三氯嘧啶或三聚氯氰、苯胺、苯并咪唑、吡咯为起始原料,经多步反应合成目标化合物;采用MTT法,以BMCL-200908069-1为阳性对照药,以H460、A549和H226为测试细胞株,对目标化合物进行抗肿瘤活性评价。结果合成了20个未见文献报道的6-取代亚甲肼基-2,4-双吗啉嘧啶及三嗪类化合物,其结构经MS、1H-NMR谱确证。结论体外活性实验显示:该系列化合物具有较强的抗肿瘤活性,其中,化合物6a活性最佳,其对H460、A549和H226抑制作用的IC50值分别为3.4、0.75、0.86μmol.L-1,其活性为阳性对照药的2.8～16.