125 mg/L时,能显著增加E2的分泌量(P0.05)。c 没有 AMP通路抑制剂H89和p38MAPK通路抑制剂SB203580能够抑制党参炔苷对卵巢GCs分泌E2的促进作用(P
目的探讨积雪草苷对阿霉素诱导的足细胞中的细胞骨架及p38通路的影响。方法用1μmol/L阿霉素制造足细胞损伤模型,检测荧光显微镜观察足细胞骨架蛋白,Western

blotting检测足细胞p38信号通路的磷酸化水平。结果与模型对照组相比,积雪草苷预孵育后足细胞骨架的结构得以很好的保存。p38抑制剂SB203580拮抗阿霉素对足细胞的损伤,足细胞骨架结构较好。阿霉素(1μmol/L)显著升高p38的磷酸化水平,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),提示阿霉素可诱导p38通路的活化。积雪草苷预处理细胞后,能够有效地遏制阿霉素诱导的p38通路活化,使p38的磷酸化水平显著降低,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。p38抑制剂SB203580能拮抗阿霉素诱导的足细胞p38磷酸化,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论积雪草苷可以通过抑制p38磷酸化减少阿霉素对足细胞骨架的损伤作用。
目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)向间充质转分化的模型并探讨其可能的信号转导途径。方法以HUVECs为研究对象,分组如下:对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)模型组、TGF-β1+DMSO组以及TGF-β1+抑制剂干预组。TGF-β1模型组应用5ng/mL TGF-β1刺激HUVECs 72h;TGF-β1+DMSO组应用5ng/mL TGF-β1及1μL/mL DMSO刺激HUVECs 72h;TGF-β1+抑制剂干预组分别应用p38MAPK抑制剂SB203580(5mmol/L)或ERK抑制剂U0126(10mmol/L)或JNK抑制剂SP600125(5mmol/L)干预TGF-β1诱导的内皮细胞,倒置显微镜观察内皮细胞形态,应用免疫荧光法检测VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的分布情况;并应用Western 已经 blot法检测VE-cadherin和α-SMA的蛋白表达情况。结果 TGF-β1(5ng/mL)刺激HUVECs 72h后,内皮细胞形态由卵圆形铺路石状向梭形转变,与0h相比,VE-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05),α-SMA蛋白表达显著上调(P
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶p38族(p38MAPK)信号通路在鼻炎性嗅觉障碍疾病中的作用,以及p38MAPK特异性抑制剂(SB203580)对嗅黏膜的保护作用。方法选取SD大鼠,随机分成4组,经鼻孔滴入菌液制备鼻炎大鼠模型,静脉注射特异性抑制剂(SB203580)进行干预。HE染色观察大鼠鼻黏膜的损伤情况;免疫组化法检测嗅黏膜磷酸化p38MAPK的表达。结果与空白对照组比较,鼻炎组大鼠嗅黏膜p38MAPK的表达明显增强(P=0.028
本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol/L)预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2.4mmol/L;PI/Annexin

那个 V-FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase-9、bcl-2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1.2和2.4mmol/L BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加(P<0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05);添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低(P<0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。
目的探讨P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导人肺微血管内皮细胞凋亡中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞株进行复苏及传代培养,分为空白对照组、低氧组(低氧6 h、12 h、24 h)、肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激组(用10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml的TNF-α进行刺激)、模型组(低氧24 h+TNF-α100 ng/ml联合刺激)及通路阻断剂组(加入通路阻断剂SB203580进行干预)。Western-blot法分析各组细胞中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)表达,流式细胞术分析各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活力,流式细胞术和TUNEL法联合检测细胞凋亡。结果与空白对照组相比,模型组p-P38MAPK表达升高(P<0.01);与模型组相比,通路阻断剂组细胞Caspase-3活力下降(P<0.

0001)。与对照组相比，在GIST-T1中转染miR-218mimic48h后，细胞中miR-218的表达显著上升(p<0.01)。MTT结果显示：在GIST-T1细胞中过表达miR-218后，细胞活力显著下降(p<0.01)。流式细胞仪分析结果显示：过表达miR-218后，细胞的增殖指数明显下降(p<0.01)；细胞的凋亡显著增加(p<0.01)。transwell侵袭小室检测结果显示：增强miR-218的表达后，穿过transwell小室的细胞数显著降低(p<0.01)。与对照组相比，在GIST430细胞中转染miR-218mimic48h后，细胞中miR-218的表达显著上升(p<0.01)，转染miR-218inhibitor后，miR-218的表达明显下降(p<0.01)。与对照组相比，在GIST882细胞中转染miR-218mimic48h后，细胞中miR-218的表达显著上升(p<0.01)，转染miR-218inhibitor后，miR-218的表达明显下降(p<0.01)。MTT和流式细胞仪检测结果显示：在甲磺酸伊马替尼作用下的GIST882细胞中抑制miR-218表达后，细胞活力明显上升(p<0.01)，细胞凋亡数明显减少(p<0.05)；而在甲磺酸伊马替尼作用下的GIST430细胞中miR-218过表达后，细胞活力明显下降(p<0.01)，细胞凋亡数明显增加(p<0.01)；促进细胞凋亡(p
第一部分PI3K/AKT/mTOR信号转导通路在弥漫大B细胞淋巴瘤中的活化及临床意义

LBH589体内 弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是最常见的非霍奇金淋巴瘤，占国外新发淋巴瘤病例的30%，占中国新发淋巴瘤病例的40-50%。针对肿瘤信号通路的研究可以更好地理解DLBCL的分子生物学发病机制，并开发新的靶向治疗手段。我们研究了DLBCL病理标本中PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白的表达及其与临床预后的联系。在DLBCL细胞株中评估了利妥昔单独及联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂雷帕霉素的抗肿瘤效果。共有73例患者的病理学组织标本受检，包括45例男性和28例女性，年龄分布为18-78岁（平均年龄50岁）。P-AKT阳性标本为40例（54.8%），p-p70S6K阳性标本为34例（46.6%），p-4E-BP1阳性标本为33例（45.2%）。p-AKT表达与临床疗效呈负相关。在CHOP治疗组中p-AKT阳性患者PFS和OS较p-AKT阴性患者低；R-CHOP组中无明显统计学差异。DLBCL细胞中存在PI3K/AKT/mTOR信号通路的异常活化，p-AKT和p-mTOR及其下游主要效应蛋白p-p70S6K和p-4E-BP1的高表达。利妥昔联合mTOR抑制剂雷帕霉素能增加对该通路的抑制作用。总之，PI3K/AKT/mTOR信号转导通路在DLBCL中异常活化与疾病的发生发展密切相关，并且是预后的不良因素。PI3K/AKT/mTOR异常活化的患者疾病进展迅速，对治疗反应差，生存期短。利妥昔可下调PI3K/AKT/mTOR通路活性，减少该通路对疾病的不良影响。利妥昔联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂有望成为DLBCL新的靶向治疗手段。

AP24534溶解度 第二部分利妥昔联合everolimus靶向AKT/mTOR途径治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的临床前研究

ABT-888制造商 本研究评估了抗CD20单抗利妥昔联合mTOR特异性抑制剂everolimus的抗肿瘤效果。与利妥昔及everolimus单药相比，两药联合可更有效地抑制细胞增殖，具有明显的协同抗肿瘤效应，能显著下调AKT、mTOR及下游效应分子。联合处理组肿瘤细胞发生明显G0/G1期阻滞，凋亡细胞比例增高。利妥昔可下调p-AKT表达，避免抑制mTOR引起的AKT负反馈性激活，从而进一步下调mTOR通路活性。利妥昔联合everolimus在动物模型上同样具有明显的协同抗肿瘤效应。本研究为临床采用利妥昔-everoliums联合方案治疗DLBCL提供了理论依据。 第三部分PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235靶向治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的体外研究 目的：在体外水平研究新型PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235对弥漫大B细胞株的靶向作用及机制。方法：采用CCK-8法检测NVP-BEZ235对弥漫大B细胞株SUDHL-4和DB增殖的影响，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡，蛋白印迹法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路靶蛋白、细胞周期/凋亡相关分子的变化。结果：NVP-BEZ235可呈剂量依赖性地抑制弥漫大B细胞株SUDHL-4和DB的增殖；使细胞周期阻滞于G0/G1期，并诱导细胞凋亡；蛋白印迹法显示NVP-BEZ235能抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键分子的活性，下调细胞周期相关蛋白和抗凋亡蛋白，上调促凋亡蛋白。结论：PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235可在体外水平抑制弥漫大B细胞株SUDHL-4和DB的生长，使细胞周期阻滞在G0/G1期，并诱导细胞凋亡，有望成为的DLBCL新的靶向治疗药物。
20(S)-原人参二醇（Protopanxadiol, PPD）是从西洋参（Panax quinquefoliumL.）茎叶总皂苷中提取、分离、转化而得到的人参二醇组皂苷元，分子式为C30H52O3，相对分子质量为460.

gingivalis低毒力株ATCC 33277和高毒力株W83、人脐静脉血管内皮细胞株,建立P. gingivalis ATCC 33277和W83侵入HUVEC模型。 2、MTT比色法检测P. gingivalis侵入前后细胞增殖活性变化,流式细胞仪测定细胞周期。 3、Annexin V-FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡率,免疫荧光染色和细胞核DNA阶梯状图谱电泳分析进一步证实细胞凋亡 4、RT-PCR和Western印迹法检测P. gingivalis侵入血管内皮细胞前后ICAM-1、VCAM-1和E选择素基因的mRNA及蛋白表达变化,细胞免疫荧光染色法测定ICAM-1、VCAM-1和E选择素膜蛋白表达。 这个 5、Western印迹法检测IκB-α和磷酸化p38 MAPK表达；间接免疫荧光法检测HUVEC NF-κB p65核移位。 6、NF-κB抑制剂MG132和p38 MAPK抑制剂SB203580预处理细胞后,分别建立P. gingivalis ATCC 33277和W83侵入模型,分析NF-κB/IκB和p38 MAPK信号通路在P. gingivalis侵入血管内皮细胞影响粘附分子表达过程中的作用。

三、统计分析 结果以均数±标准差(x±s)表示,实验重复3次,采用SAS 8.12软件包,多组均数之间的比较采用重复测量资料的方差分析,P0.05)；P. gingivalis侵入改变细胞周期分布,使G1期细胞增加(P<0.05),8h显著回落(P0.05)；P. gingivalis ATCC 33277和W83侵入后4h即诱导ICAM-1、VCAM-1和E选择素膜蛋白表达(P<0.05),ICAM-1和VCAM-1蛋白表达在侵入后8h和24h有持续的高表达(P<0.05)；E选择素蛋白表达在侵入后8h达高峰,侵入后24h仍有较高的表达(P
普通针毛蕨(?)acrothelypteris 或者 torresiana (Gaud.) Ching是金星蕨科针毛蕨属植物,主要分布于我国长江以南各省区。由于该植物具有亲热解毒,软坚散结的功效,在民间常被用于止血和治疗水肿。已有文献报道,普通针毛蕨中所含的主要成分Protoapigenone具有良好的抗肿瘤活性,且对诸多肿瘤细胞都表现出明显的细胞毒作用。本实验室研究发现,由该植物首次提取制备的黄酮类化合物2-(顺-1,2-二羟基-4-酮-环己-5-烯)-5,7-二羟基-色原酮(DEDC)是Protoapigenone的结构类似物,对多种肿瘤细胞也呈现出显著的增殖抑制活性。 近年来不断发现,植物黄酮(flavonoids)集许多优良的生理、药理学活性于一身,在癌症及心血管疾病的预防、治疗方面以其天然、高效、低毒的特点而倍受瞩目。黄酮类化合物抗肿瘤机制的报道常常见诸报端,但是总的来说,其具体的防癌、抗癌机理目前尚未明确。近一两年国外研究者在植物黄酮抗肿瘤研究方面取得了突破性的进展,发现许多药物具有的抗氧化与促氧化活性、生物膜保护作用、线粒体毒性损伤、蛋白酶体抑制反应、信号转导抑制与调节功能在抗肿瘤效应及诱导肿瘤细胞凋亡方面起关键作用。

植物黄酮结构上属于多酚类植物化合物,一直被认为是高效的天然抗氧化剂。事实上,植物黄酮作为功能物质起效时,同时具有抗氧化与促氧化两种截然相反的特性。人们通常把植物黄酮对疾病的预防作用归因于其具有良好的抗氧化活性及自由基清除特性。事实上,这些多酚类化合物在抗癌及诱导肿瘤细胞凋亡方面,其促氧化活性起着比抗氧化更为重要的作用。研究表明,这些植物多酚类物质能催化谷胱甘肽(GSH)或辅酶Ⅰ氧化而产生活性氧(ROS),而许多化疗药物能诱导细胞核DNA片段化引起不可逆损伤并促使肿瘤细胞凋亡都是通过ROS介导产生的。

目前,对于黄酮类化合物DEDC的抗肿瘤作用机制并不十分清楚,认为至少可能包括以下两个方面：1.DEDC通过在细胞内的促氧化作用,造成氧化压力,引起氧化应激而损伤生物膜、DNA及其它生物大分子诱导肿瘤细胞凋亡。2.通过在较高浓度下产生ROS调节某些细胞信号转导途径,如：丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs);转录信号传导子与激活子3(STAT3);核转录因子κB (NFκB)等的活性,继而调节细胞生理过程的各个方面,包括细胞的增殖、分化和凋亡 本研究用DEDC处理人肝癌细胞HepG2以及人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法、流式细胞术(flow 时间 cytometry, FCM)凝胶电泳迁移实验(EMSA)、免疫印迹实验(Western-blot)、和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法分别检测HepG2及SH-SY5Y细胞在DEDC处理后,细胞DNA损伤情况和凋亡相关基因及蛋白表达水平的变化。为了进一步阐明ROS及有关细胞信号分子在肿瘤细胞凋亡中所起的作用, ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC), JNK1/2抑制剂SP600125, P38 MAPK抑制剂SB203580被用于实验,测定ROS、JNK、P38等信号分子在DEDC诱导的HepG2细胞凋亡中起什么作用；同时,NAC和NF-κB抑制剂PDTC被用于检测ROS和NF-κB对SH-SY5Y细胞凋亡的影响。 第一部分DEDC对HepG2细胞毒性作用及其凋亡机制的研究 鉴于黄酮类化合物protoapigenone展示出较强的抗癌活性,本试验旨在探讨其结构类似物2-(顺-1,2-二羟基-4-酮-环己-5-烯)-5,7-二羟基-色原酮(DEDC),种首次从普通针毛蕨分离得到的黄酮类化合物,对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用及其诱导凋亡的分子机制,同时为进一步检测了ROS捕获剂NAC及MAPK通路抑制剂对DEDC诱导,实验设计中采取了对细胞预先用不同抑制剂加以处理的方法再观察肿瘤细胞凋亡效应的变化。 将肝癌细胞HepG2和肝正常细胞LO2分别暴露于DEDC (2.5,5, 10μg/ml)或protoapigenone (2.

347%、0.784%、42.973%、73.448%及58.591%。3.rt-pcr扩增结果:shh、ptch1、smo、gli1mrna在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达明显增多(p0.05)。临床病理特征的关系:中低分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1mrna平均表达水平均高于高分化胰腺癌组织平均表达水平,差异具有统计学意义(p<0.05)。westernblot实验结果:分别检测shh、ptch1、smo、gli1蛋白在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达均明显增多(p0.05)。临床病理特征的关系:中低分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1蛋白平均表达水平均高于高分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1蛋白平均表达水平,差异具有统计学意义(p<0.05);中低分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1蛋白平均表达水平均高于高分化胰腺癌组织ptch1蛋白平均表达水平,差异具有统计学意义(p0.05)。预后因素的分析:单因素分析:22纳入个因素中,性别、分期、淋巴结转移、术后化疗、术后胰瘘发生及smo基因的高表达6个为显著性因素(p<0.05),将上述6个因素代入cox回归方程,结果示:分期、术后化疗和术后胰瘘的发生为影响术后患者预后的独立因素(p<0.05),其中分期、术后胰瘘的标准回归系数为正值,表明其与患者术后死亡呈正相关,而术后化疗为负值,说明其为胰腺癌患者术后预后的保护因素。结论:1.胰腺癌中的确存在sp细胞,其表型为cd133十和cd44+cd24-esa+,具有肿瘤干细胞的生物学特性。2.针对hh信号通路关键基因smo设计了3条sirna片段,成功构建了携带这3条片段的慢病毒表达载体,通过转染sw1990细胞后对smo表达的抑制率筛选出最为适于后续研究的smosirna慢病毒表达载体,这不仅为本研究后续研究的顺利开展奠定了良好的实验基础,也为针对hh信号通路靶向干扰的基因治疗研究提供了一定实验证据。3.shh、ptch1、smo、gli1mrna在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达明显增多,而且在低分化胰腺癌组织平均表达水平高于高分化胰腺癌组织平均表达水平;与患者年龄、肿瘤直径、tnm分期、侵犯血管和神经、淋巴结转移无关。shh、ptch1、smo、gli1蛋白在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达明显增多,以上四个蛋白在低分化胰腺癌组织中平均表达水平高于高分化胰腺癌组织平均表达水平;胰腺癌组织中蛋白表达与胰腺癌的分化程度显著有关,与患者年龄、肿瘤直径、tnm分期、侵犯血管和神经、淋巴结转移无关。影响胰腺癌预后的因素中分期、术后胰瘘与患者术后死亡呈正相关,而术后化疗为胰腺癌患者术后预后的保护因素。
目的：对伊马替尼（格列卫）治疗慢性粒细胞白血病的疗效及生存分析。方法：66例CML患者口服伊马替尼治疗后，定期检测血常规、染色体核型、bcr-abl融合基因，评估其疗效、总生存（OS）率和疾病无进展（PFS）情况。结果：中位伊马替尼治疗时间为26.5（6-112）个月。1.慢性期患者累积所获得的完全血液学缓解率（CHR）、主要细胞遗传学缓解率（MCyR）、完全细胞遗传学缓解率（CCyR）和主要分子学缓解率（MM0R）分别是94.5%、87.3%、78.2%和69.1%。与加速期及急变期患者评估结果比较，差异有统计（P＜0.05）。慢性期患者中，低危组与高危组之间累积达到的MM0R差异存在统计学意义（P=0.047）。2.慢性期的患者1年、2年和4年总的OS率分别是（97.7±1.1）%、（96.2±3.8）%、（90.1±6.8）%，疾病无进展（PFS）率分别是（95.3±3.3）%、（83.0±6.5）%、（76.6±8.6）%。加速期和急变期患者在6个月、1年、15个月的OS率为（91.7±8）%、（75±2.5）%、（66.7±3.6）%。1年和2年的PFS率是（75.0±15.3）%、（60±18.2）%。慢性期的患者达CCyR、MM0R较之加速期和急变期患者之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：伊马替尼（格列卫）治疗慢性粒细胞白血病慢性期患者可获得较高的遗传学缓解和分子学缓解，明显延长生存时间，但是对加速期和急变期疗效则不理想，伊马替尼耐药仍是现在临床治疗中面临的主要问题。
有关宫颈癌是否存在Hedgehog信号通路及EMT(epithelial

所以 不 mesenchymal transition上皮间质转化)相关因子的异常表达以及对宫颈癌的发生,侵润及转移的影响,目前相关报道甚少。本研究通过以不同浓度非甾体生物碱cyclopaine阻断Hedgehog言号通路,观察宫颈癌Hela细胞中Hedgehog信号通路关键因子Gli-1和EMT相关因子Slug表达受抑制后,宫颈癌细胞生物学行为的改变,探索其作为宫颈癌Hedgehog-EMT信号通路治疗新靶点的可能性。

目的： 宫颈癌Hela细胞中观察Hedgehog信号传导通路关键因子Gli-1及EMT相关因子Slug的表达,探索Hedgehog信号传导通路和EMT相关因子对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 JQ1供应商 方法： 1. MTT法和软琼脂克隆形成实验,检测宫颈癌Hela细胞的细胞体外增殖能力和细胞集落形成能力。 2. RT-PCR的方法检测宫颈癌Hela细胞中Gli-1和Slug基因mRNA的表达。3. Western-Blot方法检测宫颈癌Hela细胞Gli-1和Slug蛋白的表达。 结果： 1.MTT和软琼脂克隆形成实验结果显示,随着Hedgehog信号传导通路抑制剂cyclopamine药物浓度的增加,细胞增殖率及细胞集落的形成能力下降,具有显著差异(p
目的结合上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)与肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)学说,初步研究EMT是否能使涎腺腺样囊性癌细胞的干细胞相关标记的表达产生变化,并讨论其意义。 方法(1) TGF-β1诱导培养ACC-M细胞发生EMT的形态学动态观察：体外培养涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M,经TGF-β1诱导后连续观察其细胞形态的变化；(2)TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞EMT及CSCs相关标记物表达的变化：实验分两组,实验组ACC-M细胞培养时加入TGF-β1使其浓度达到10g/ml,对照组加入等量PBS液；流式细胞术检测培养0h、24h、48h后ACC-M细胞的EMT相关标记物E-cad、N-cad、vimentin,以及肿瘤干细胞相关标记物0ct-4的表达情况；实验结果经SPSS11.0软件统计,采用重复测量数据方差分析中的广义线性模型(General Linear Model,GLM)进行数据分析。 结果 1.

建立AS动物模型,研究visfatin在AS小鼠血清和主动脉组织中的表达情况及小檗碱的干预作用； 2.研究AS小鼠血清脂质、血浆白介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)含量及小檗碱的干预作用； 3.研究小鼠主动脉AS斑块形态学测定,并检测AS斑块内visfatin表达,探讨小檗碱的干预作用。 4.研究visfatin是否能诱导HUVEC分泌炎症因子IL-6、TNF-α,及其促炎症作用是否受p38MAPK、ERK和JNK信号通路的调节。

5.研究小檗碱在visfatin诱导HUVEC分泌炎症因子IL-6、TNF-α过程中的干预作用及其机制是否受p38MAPK、ERK和JNK信号通路的调节。 方法： 1.动物部分 50只8周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为5组,每组10只,分别为：①模型组、②小檗碱低剂量组、③小檗碱中剂量组、④小檗碱高剂量组、⑤辛伐他汀组,均予高脂饲料喂养；以10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠作为⑥对照组,予普通饲料喂养。②、③、④组分别给予小檗碱2.5、5、7.5mg/kg腹腔注射,每日一次；⑤组给予辛伐他汀药液灌胃5mg/kg,每日一次；①、⑥组灌服等剂量生理盐水,每周测体重一次,实验为期16周。 腹腔麻醉小鼠,眼球摘除法采血。行心脏灌注,自小鼠主动脉根部至腹主动脉末端部分离整条主动脉,部分主动脉组织用4%多聚甲醛中固定,其余放入液氮中保存。 Rapamycin 主动脉组织行石蜡包埋、切片、髓染色观察小鼠主动脉组织病理形态学改变,比较各组斑块面积百分比；免疫组化法检测小鼠主动脉AS斑块visfatin的表达；分离血清及血浆,测血清甘油三脂(triglycerides, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,

LDL-C)含量；ELISA法检测血清visfatin含量及血浆IL-6、TNF-α含量；主动脉组织提取蛋白,westernblotting测小鼠主动脉visfatin的表达。用SPSS13.0软件对实验结果进行数据统计学分析,P0.05)；小檗碱高剂量组与小檗碱中剂量组、小檗碱低剂量组体重增加值无显著差异(P>0.05)。 2.血脂检测结果：模型组血脂水平显著高于对照组(P<0.05),各给药组血清TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,HDL-C高于模型组。与模型组相比,小檗碱高剂量组、辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C显著降低(P<0.05)。小檗碱高剂量组血脂水平低于小檗碱低、中剂量组,其中TG水平降低尤为明显(P0.05)；小檗碱高剂量组与辛伐他汀组差异无统计学意义(P>0.05)。 4小鼠主动脉AS斑块visfatin的表达：各给药组visfatin表达较模型组均显著升高(P<0.05)；小檗碱高剂量组与小檗碱中剂量组、小檗碱低剂量组visfatin表达均有显著差异(P0.05)。 5小鼠血清visfatin水平：辛伐他汀组、小檗碱低剂量组、小檗碱中剂量组、小檗碱高剂量组小鼠血清visfatin水平较模型组显著降低(P=0.00)；小檗碱低剂量组小鼠血清visfatin水平较小檗碱中剂量组、小檗碱高剂量组显著增高(P0.05)；小檗碱高剂量组小鼠血清visfatin水平与小檗碱中剂量组无显著差异(P=0.062)。 Selleck Sotrastaurin 6.小鼠主动脉visfatin蛋白的表达：各给药组小鼠主动脉visfatin蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)；小檗碱低剂量组小鼠主动脉visfatin蛋白表达显著高于辛伐他汀组(P<0.00)；小檗碱高剂量组小鼠主动脉visfatin蛋白表达显著低于辛伐他汀组(P<0.00)；辛伐他汀组小鼠主动脉visfatin蛋白表达与小檗碱中剂量组无显著差异(P0.05)；小檗碱低剂量组小鼠血浆IL-6与小檗碱中剂量组差异无统计学意义(P=0.277)；小檗碱高剂量组小鼠血浆IL-6与小檗碱中剂量组差异无统计学意义(P=0.343)。小檗碱高剂量组小鼠血浆TNF-α与辛伐他汀组、小檗碱中剂量组、小檗碱低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)；辛伐他汀组小鼠血浆TNF-α显著低于小檗碱低剂量组、小檗碱中剂量组(P0.05)。

8.Visfatin对HUVEC增殖的影响：visfatin浓度梯度组结果显示：50、100、150、200μg·L-1visfatin组均可显著抑制HUVEC增殖(P0.05)；visfatin时间梯度组结果显示：与对照组相比,100μg·L-1visfatin作用12h、24h、48h后均能显著抑制]3UVEC增殖(P<0.05),100μg·L-1visfatin作用24h与作用3h、6h、12h相比对HUVEC增殖抑制的差异有统计学意义(P0.05)。 9小檗碱及MAPKs通路抑制剂对visfatin影响HUVEC增殖的干预作用：50、100μmol·L-1小檗碱均可显著减轻visfatin对HUVEC增殖的抑制作用(P=0.00)；两组间无显著差异;P>0.05)。 NU7441细胞系 PD98059、SB203580和SP600125均可显著减轻visfatin对于IUVEC增殖的抑制(P0.05)；PD98059、SB203580和SP600125减轻visfatin对]HUVEC增殖的抑制能力与小檗碱组无显著差异(P>0.05)。 10.Visfatin对HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达的影响：浓度梯度组结果显示：50μg·L-1visfatin作用24h后即可显著增高HUVEC中p-ERK1/2蛋白的表达(P–0.00),100、200μg·L-1visfatin作用24h后HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达的增高较50μg·L-1visfatin组有显著差异(P=0.00)；时间梯度组结果显示：100μg·L-1visfatin作用12h后可显著增高HUVEC中p-ERK1/2蛋白的表达;P=0.024),100μg·L-1visfatin作用24h、48h组较作用12h组HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达增高的差异具有显著性(P=0.00),24h和48h两组间无显著差异(P=0.236)。 11. Visfatin对HUVEC中p-p38MAPK蛋白表达的影响：浓度梯度组结果显示：50μg·L-1visfatin作用24h后即可显著提高HUVEC中p-p38MAPK蛋白的表达(P=0.016),100μg·L-1visfatin作用24h后此作用达到峰值(P=0.

20±1.59，G~-菌败血症组为6.78±1.79，高于G~+菌败血症组5.39±0.78，(t=2.29，P=0.037)，在新生儿细菌性肺炎组、细菌性脑膜炎组和尿路感染组也明显增高。单核细胞TLR4蛋白表达在各感染组与非感染组之间差异无统计学意义，感染组TLR4阳性细胞百分比为(0.71±0.31)％，高于非感染组(0.29±0.36)％。中性粒细胞TLR4蛋白表达在败血症组最高，为3.25±1.25，在G~+菌败血症表达为2.97±1.48，G~-菌败血症为3.75±1.01，两者比较P＜0.05，肺炎组、脑膜炎组和尿路感染组比非感染组明显增高。感染组TLR4阳性细胞百分比与非感染组比较差异无统计学意义。 6．MD-2 mRNA在新生儿败血症组表达最高，G~+菌败血症组表达为5.43±1.19，G~-菌败血症组表达为5.76±1.17，两者比较差异无统计学意义(t=0.594，P=0.56)，细菌性脑膜炎组、尿路感染组MD-2 mRNA显著增高。MyD88 mRNA在新生儿败血症组表达最高5.71±0.94，MyD88 mRNA在G~+菌败血症组表达为5.92±1.01，在G~-菌败血症组表达为5.79±0.85，两者比较差异无统计学意义(t=0.793，P=0.86)，MyD88

mRNA在新生儿各感染组均显著增高。在败血症组，TLR2 mRNA与MD-2 mRNA相关系数为0.415，P=0.011；在肺炎组的相关系数为0.38，P=0.04。新生儿感染组TLR4 mRNA与MD-2 mRNA成正相关(R=0.39，P=0)，败血症组，TLR4 mRNA与MD-2mRNA相关系数为0.442，P=0.021：脑膜炎组TLR4 哪里 mRNA与MD-2 mRNA相关系数为0.913，P=0.004；尿路感染组相关系数为0.21，P=0.045。TLR2 CB-839核磁共振 mRNA与MyD88 mRNA相关性显著(R=0.956，P=0.00)。TLR4 mRNA与MyD88 mRNA相关性显著(R=0.997，P=0.00)。TLR3 mRNA与MD-2和MyD88 mRNA均无明显相关性。 7．G~+菌败血症组TLR2 mRNA(6.43±0.74)表达显著高于TLR4

mRNA(5.39±0.78)(t=1.56，P=0.024)，G~-菌败血症组TLR4 mRNA(6.78±0.79)表达显著高于TLR2 mRNA(5.64±0.68) (t=2.63，P=0.011)。败血症组单核细胞TLR2蛋白表达显著高于TLR4表达，有统计学意义(t=1.06，P=0.044)。TLR4阳性细胞百分比均显著低于TLR2阳性细胞百分比，P＜0.01。各感染组中性粒细胞表面TLR4蛋白表达水平高于TLR2，P＜0.05；各感染组与非感染组之间比较，TLR4阳性细胞百分比均显著低于TLR2阳性细胞百分比，P＜0.01。 8．败血症组CD64表达为7845.25±1790.07 M／U，显著高于局部感染组4003.86±1790.07 M／U(P=0.00)；通过绘制ROC曲线确定CD64阳性标准为≥3000 M／U。新生儿败血症组，CD64检测阳性率为91％，灵敏度为92％，明显高于血培养及CRP。败血症组和其他感染组TLR2和TLR4蛋白表达与CD64相关性分析，在败血症组TLR2和TLR4与CD64有显著相关性，通过TLR2和TLR4可区分G~+和G~-菌感染，但CD64不能。

结论新生儿感染时不同免疫细胞TLR2 mRNA／蛋白和TLR4 mRNA／蛋白表达显著增高，特别是在严重感染败血症组。TLR2主要在G~+菌感染增高，TLR4主要在G~-菌感染增高。TLR2和4表达与MD-2和MyD88有相关性，提示TLR2和TLR4及信号传导途径均参与新生儿抗感染免疫机制。新生儿感染时中性粒细胞CD64表达明显增高，可望成为诊断新生感染的指标，中性粒细胞表面TLR与CD64有显著相关性。这些结果为进一步深入了解新生儿抗感染免疫机制提供新思路和实验基础。
研究目的：本课题将从临床观察持续性非卧床腹膜透析(CAPD)患者腹膜透析液内皮素-1(endothelin—1，ET—1)水平，并从细胞水平探讨局部内皮素系统在腹膜纤维化形成中的作用机制，通过体外实验应用非选择性内皮素受体拮抗剂(ETA／ETB受体拮抗剂PD142893)对腹膜间皮细胞进行干预，研究腹膜局部内皮素系统在腹膜纤维化形成中的作用，探讨腹膜纤维化的发生机制及治疗策略。 研究方法：1．在本院定期随访的CAPD患者中选取26例患者，放免法测定透析液及血浆中ET—1的表达，通过腹膜平衡试验(PET)确定患者腹膜转运类型，记录超滤量。通过Pearson相关分析，单因素方差分析和线性回归方程，分析血浆与腹透液ET-1的表达和意义。以人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)为研究对象，采用放免法、免疫细胞化学检测不同时间、不同浓度的葡萄糖、甘露醇作用下人腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell，HPMC)分泌的ET-1水平。采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测局部内皮素系统ET-1、内皮素受体(ETAR、ETBR)及内皮素转化酶(ECE)的基因表达。2．相差显微镜下观察HPMC细胞的形态改变，免疫细胞化学观察细胞角蛋白(CK)、波形蛋白的表达。氚标胸腺嘧啶核苷渗入法测定细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期。乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞损伤。3．采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放免法检测不同浓度的葡萄糖、ET-1作用下Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)及转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-1β(IL-1β)蛋白水平，RT-PCR检测ColⅣ、Fn、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因表达，并在高糖和ET-1基础上加入非选择性内皮素受体拮抗剂(PD142893)，观察上述指标的变化。免疫印迹法(Westernblot)检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)蛋白水平。 和 研究结果：1．透析液中ET-1的实测值明显高于预测值(P＜0.05)。不同腹膜转运类型血浆、腹膜透析液ET-1的浓度、内皮素透析液血浆比值(D／P_(ET-1))各组间均无显著差异(P＞0.

采用免疫组化方法检测72例胃癌患者的胃癌及其癌旁组织中htert、gli1、gli2的表达;2.根据72例胃癌标本中htert和gli1、gli2表达,分别统计分析htert和gli1、htert与gli2之间的关系;3.根据72例胃癌标本中htert和gli1、gli2表达,分别统计分析三者与胃癌患者临床病理之间的关系;4.根据72例胃癌标本中htert和gli1、gli2表达,分别统计分析三者与胃癌患者预后之间的关系。第二部分:htert促进胃癌gli1表达的分子机制研究1.采用western-blot检测7株胃癌细胞中htert、gli1的基础表达;2.采用实时荧光pcr检测bgc-823、sgc-7901转染htert24小时后gli1mrna的表达情况;3.采用western-blot检测bgc-823、sgc-7901转染htert24小时后gli1蛋白表达情况。【研究结果】第一部分:胃癌组织中人端粒酶逆转录酶与gli1、gli2表达相关性的研究1.免疫组化结果表明,htert、gli1、gli2三者在胃癌组织中的表达较癌旁组织均明显升高(p<0.01);3.72例胃癌htert、gli1、gli2高表达均与淋巴结转移密切相关(p<0.05),且gli1高表达还与胃癌患者远处转移有关(p<0.05、p<0.05),三者均高表达组预后最差(p
刺猬通路是一条重要的胚胎通路。在胚胎时期,它能够促进细胞的增殖、分化,如果被阻断会导致畸形的发生;在成年时期,刺猬通路参与组织的修复,一般处于静默状态,如果被异常活化会引发癌症,比如:髓母细胞瘤和基底细胞癌。SMO蛋白是这条通路中一个关键的组成部分,抑制SMO蛋白能够阻断刺猬通路,这会成为抗肿瘤的一种新途径。目前针对刺猬信号通路已经发表了很多小分子抑制剂,其中小分子SMO蛋白抑制剂Vismodegib(GDC-0449,用于治疗晚期的基底细胞癌)的成功上市,标志着刺猬信号通路抑制剂用于抗肿瘤的可行性。然而,Vismodegib的理化性质差,且已经出现耐药性,这就表明科学家们仍然需要研究新型的分子骨架以改善理化性质和对抗已出现的耐药性。Vismodegib理化性质差的主要原因是分子骨架中的碳原子都是sp2杂化,这就使得整个分子比较平,因而它的溶解度低、熔点高。为解决这个问题,我们引入了sp3杂化的碳原子,合成了一系列胺基噻唑-吡啶杂环类化合物作为新型的刺猬通路拮抗剂,这些化合物的活性接近或优于Vismodegib,而且化合物的熔点更低、溶解度更好。化合物11和30在老鼠体内具有良好的药物代谢动力学性质,且生物利用度都比较好,分别是34%和77%,说明这类新型化合物可用于进一步的药效学研究。在这类新型化合物中,有些分子表现出化学不稳定性,因此我们又在原来分子骨架的基础上增加了一些小分子基团来消除潜在的代谢位点,以得到更稳定的化合物。化合物的合成及后续的细胞生物实验正在进行中。
刺猬通路在胚胎成长阶段,对胚胎的生长分化起到重要作用;而在成人中它的作用局限于组织维持和修复。它的异常激活与多种肿瘤的发生有关,开发刺猬通路的抑制剂成为治疗肿瘤的一个途径。刺猬通路主要由Hedgehog(Hh)配体、Patched(Ptch)、Smoothened(Smo)蛋白和Gli转录因子等组成。现在研究最多的是Smoothened蛋白抑制剂。此类抑制剂已有多个进入临床的化合物。已经批准上市的药是GDC-0449,但它溶解度低、有较强的副作用且已经产生了耐药性。我们对比分析了近几年的临床化合物和已经上市的药物,依据药物设计原理设计出具有哌嗪并咪唑类结构的新型化合物,希望能够提高药物物理化学性质,并保持其抗癌活性。由2-氨基吡嗪开始,经过一系列步骤合成出尾部具有酯、酰胺、胺及反转酰胺的片段,与2,,5,-二氯-3,5-二甲基-2,4,-联吡啶片段连接成最终化合物。对合成出的29个化合物的构效关系进行了探讨,优选出了活性最好的化合物(IC50=0.087μM)。这为我们进一步优化构效关系奠定了基础。
本论文的工作分为以下两个部分：第一部分重组人精氨酸酶(rhArg)对非何杰金淋巴瘤的细胞毒性及细胞自噬在rhArg杀伤非何杰金淋巴瘤细胞中的作用研究近年来,靶向细胞代谢尤其是精氨酸代谢治疗肿瘤受到了大量关注。精氨酸酶是一种精氨酸降解酶,对多种恶性实体瘤均有杀伤效果。本课首次研究了rhArg对非何杰金淋巴瘤(NHL)细胞的细胞毒性。细胞自噬真核细胞内遗传保守的蛋白质降解途径,在维持细胞内环境稳态及细胞增殖、分化和死亡等过程中起重要作用,与肿瘤治疗息息相关。研究表明生长因子、氨基酸缺乏等外界刺激会诱导细胞自噬。但精氨酸酶能否诱导NHL细胞自噬尚未见报道,本课题首次研究了rhArg诱导NHL细胞自噬以及细胞自噬在rhArg杀伤NHL细胞中的作用和机制。选择NHL研究中最常用的细胞株Raji和Daudi作为体外模型。细胞经rhArg处理后,用MTT法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位；用电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体、western

点击此处 selleck化学药品 因为 blot检测细胞自噬相关蛋白或细胞凋亡相关蛋白的表达。用siRNA沉默细胞凋亡调控基因caspase3、细胞自噬调控基因ATG5和Beclin1。rhArg处理细胞后,用自噬抑制剂3-methyladenine (3-MA) 和 chloroquine (CQ)抑制细胞自噬。本研究结果表明：0.

MTT法结果显示，天麻素给药72h后，与谷氨酸模型组比较，各天麻素组对损伤的PC12细胞均呈现一定的保护作用；细胞形态学观察结果显示，天麻素组的细胞损伤程度减轻。

3. AO/EB染色结果显示正常组细胞形态规则，大部分细胞经AO染色成均匀一致的绿色，模型组细胞呈现橘红色荧光，天麻素给药组的细胞与模型组相比被EB染成橘红色的细胞数量较少。 4. Hoechst33258荧光染色结果显示谷氨酸模型组细胞，多数细胞核呈现蓝白色、碎块状致密浓染，呈现典型的凋亡细胞核特征；而天麻素处理后呈现凋亡特征的细胞数量减少。 5.流式细胞仪检测结果表明，天麻素给药组可明显抑制谷氨酸引起的ROS的累积；Annexin V/PI双染结果表明天麻素在一定程度上能够降低谷氨酸诱导的PC12细胞的凋亡率；罗丹明123染色结果显示天麻素给药组线粒体膜电位升高，线粒体损伤程度减轻。 6. Western blotting法检测结果表明，天麻素给药组与模型组相比能够显著下调p38的磷酸化水平，降低ERK1/2的磷酸化表达，抑制谷氨酸诱导的活性caspase-3的表达。 结论： 在一定的浓度范围内，天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有明显的保护作用，其保护作用可能与减少细胞内活性氧的生成，阻止氧化应激的发生，保护细胞膜的正常结构及稳定线粒体膜电位有关。其保护机制可能是通过下调p38磷酸化水平，降低ERK1/2的磷酸化状态及抑制活性caspase-3蛋白表达，从而阻止谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。
目的： selleckchem 观察氯化镧（lanthanum chloride）对RANKL（Receptor activator of NF-κBligand）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的作用。观察破骨细胞基因（c-fos、trap、cathepsin K、MMP-9）及NF-κB通路基因（traf6、c-src、RANK、Fra1）mRNA的表达，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞生成数量，噻唑蓝（MTT）观察破骨细胞活性，流式细胞术检测破骨细胞凋亡情况。初步分析稀土镧元素与RANKL诱导的破骨细胞之间相互关系。 方法： 实验细胞株采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7，购自中国科学院细胞库(ATCC:TIB-71)。氯化镧(LaCl3·7H20，纯度99.9%)购于美国Simga公司。重组鼠核因子KB受体活化素的配体(Receptor

Activator of Nuclear Factor-κB ligand，RANKL)购自美国R&D公司。按照实验设计以添加氯化镧浓度不同分为五组：①空白组（RAW264.7）②对照组（RAW264.7+50ng/ml RANKL）③实验组低浓度镧（RAW264.7+50ng/ml RANKL+2.5μmol/L LaCl3）④实验组中浓度镧（RAW264.7+50ng/ml RANKL+20μmol/L LaCl3）⑤实验组高浓度镧（RAW264.7+50ng/ml Selleck AC220 RANKL+100μmol/L LaCl3）。采用MTT、流式细胞术观察镧对RANKL诱导的RAW264.7活性，RT-PCR检测破骨细胞基因表达，TRAP染色分析破骨细胞生成数量。 结果： MTT检测24、48及72小时，不同浓度镧对RANKL诱导的RAW264.7无明显毒性作用，OD值差异无统计学意义（P>0.05）。 TRAP染色检测不同浓度镧对RANKL诱导RAW264.7生成破骨细胞数量。空白组无成熟破骨细胞；实验组(137.60±4.54)/cm2、(102.70±3.23)/cm2、(72.20±5.28)/cm2相较于对照组（163.00±5.82）/cm2，破骨细胞数量减少（P0.05）。 流式细胞术检测镧对破骨细胞凋亡作用，各组别之间差异无统计学意义（P>0.05）。

RT-PCR检测破骨细胞基因及通路基因c-fos、trap、RANK、traf6、c-src、Fra1、cathepsin 不 K及MMP-9的表达。对照组较实验组表达增多，差异明显（P0.05）。 结论： 不同浓度（2.5、20、100μmol/L）氯化镧对RANKL诱导的RAW264.7分化、增殖、凋亡无明显毒性作用。 不同浓度（2.5、20、100μmol/L）氯化镧减少RANKL诱导的RAW264.7向成熟破骨细胞分化。但各浓度组之间抑制作用无明显差异。 RANKL可单独诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化成熟。
猪链球菌2型(Strreptococcus suis serotype2, SS2)是一种人畜共患传染病病原,对于养殖业的健康发展以及人类的生命健康具有严重威胁。近年来,猪链球菌2型的危害引起国内外的广泛关注,其分子致病机理和免疫方面的研究是目前研究的热点。尽管很多学者从单个或多个毒力因子的角度去阐述猪链球菌2型的分子致病机理,取得了一些进展,但仍无法很好的解释其如何突破机体的天然免疫系统以及血脑屏障,从而引起脑膜炎等病症。 病原菌致病通常不是由单一毒力因子引起,而是由多种毒力因子的共同作用而造成的,毒力因子在调控系统的控制下,形成一个精致的调控网络。双组份调控系统(Two-Component Regulatory System, TCS)是细菌中广泛存在的一种重要的信号转导机制,能将外界环境中感应到的信息传给内部系统。研究证实,TCS参与调控细菌毒力因子表达、细菌致病性和生长代谢等,目前在SS2中发现有至少15对双组分调控系统。中性粒细胞(Polymorphonuclear leukocytes, PMNs or Neutrophils)存在血液中,是体内数量最多的白细胞,类似巨噬细胞,具有吞菌活性,在急性炎症中起着十分重要的作用,是机体抵抗病原菌的第一道防线。 病原与宿主的相互作用在其致病过程中扮演重要作用。尽管多种SS2毒力因子已被证实在致病中具有重要作用,但细菌与天然免疫系统作用后基因表达变化的全面分析报道却很少。而且,对猪链球菌2型引起急性炎症或逃避宿主天然免疫的分子机制了解非常有限。本文选取SS2野生株SC19和猪中性粒细胞(PMNs)为研究对象,将SS2与PMNs相互作用后,通过基因表达谱芯片、生物信息学分析、荧光定量PCR等方法获得差异表达基因并分类；以CD1小鼠为模型评价双组份调控系统基因1660HK/RR,1910HK/RR和1094HK/RR基因缺失突变株△1660HK/RR,△1910HK/RR、△1094HK/RR的毒力以及引起的炎症反应,为阐明双组份调控系统引起急性炎症反应或免疫逃避的分子机制,深入研究S. suis2分子致病机理奠定理论基础,也为S. suis2新型疫苗和药物靶标分子设计提供新的思路。具体研究内容如下： 1.猪中性粒细胞的分离和培养 本研究采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PMNs,经Giemsa染色后检测PMNs的纯度为98%,采用苔盼蓝(0.01%浓度)排除法检测PMNs活力为96%,符合实验要求。 2.猪链球菌2型感染猪中性粒细胞后转录表达谱结果与分析 将SS2与PMNs互作,并在0.

5 μmol/L HX531). The cell viability was measured by MTT, apoptosis rate of cardiomyocytes by flow cytometry analysis, and mitochondrial membrane potential(ΔΨm) by JC-1 fluorescent probe, and protein expressions of Bcl-2, Bax BI-6727 and cleaved caspase-9

with Western blotting. All measurement data were expressed as mean±standard deviation, and analyzed using one-way ANOVA and the Dunnett test. Differences were considered signif icant when P was
目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P
精神分裂症断裂基因1(DISC1)是精神疾病的重要候选基因,是精神分裂症、双相情感障碍、抑郁症、自闭症和阿斯伯格综合征的一个共同的危险因素。许多遗传研究证实,DISC1不只是与精神分裂症有关,而且与各种伴有神经发育异常和细胞内的脑功能障碍信号通路有关。目前对DISC1在中枢神经系统作用的研究主要集中在神经元发生和神经元突触发育方面,如神经元的成熟、增殖、迁移、定位、分化,树突生长和突触可塑性等。DISC1编码DISC1蛋白,DISC1蛋白是一种多功能支架蛋白,它在成人大脑,尤其在海马齿状回的神经发生和神经发育方面具有重要的作用。DISC1有望成为精神疾病和癫的一个治疗靶点。本文就DISC1的生物学特性及主要相关信号通路作一综述。
目的:探究氯化锂(Lithium

此网站 chlorid,LiCl)对人骨髓间充质干细胞(human Mesenchymal Stem Cells,hMSCs)迁移的影响。方法:采用划痕试验、Transwell chamber等方法,在梯度浓度LiCl作用下,观察对hMSCs迁移效果的影响并进行分析。结果:1划痕试验显示hMSCs在梯度浓度LiCl作用下,细胞迁移距离逐渐减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LiCl可抑制hMSCs的迁移且呈浓度依赖性。
目的:观察补肾活血方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:采用GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,然后提取和检测胞核蛋白β-catenin的表达,确定激活正常人滑膜细胞的Wnt/β-catenin信号通路的最佳时间点,然后给予补肾活血方含药血清干预,采用Western Blot检测人滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因MMP-7和Cyclin D1的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测滑膜细胞上清液中MMP-7和Cyclin selleckchem D1的表达。结果:Western Blot结果显示:成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,与正常组比较,SB-216763干预组的人滑膜细胞核蛋白β-catenin、MMP-7和Cyclin D1的表达明显升高(P
目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)对巨噬细胞系RAW264.7活化的影响。方法将生长状态良好的RAW264.7细胞分为3组:实验对照组、脂多糖(LPS)组和GSK-3β特异抑制剂SB216763干预组,在12 h、24 h进行指标检测。采用Western印迹法检测细胞GSK-3β、p-GSK-3βser9蛋白的表达,ELISA试剂盒法检测细胞上清IL-10、TNF-α的变化,RT-PCR检测细胞中5-LO mRNA变化,免疫荧光法检测ED1表达,电镜下观察RAW264.7细胞形态变化。结果12 h和24 h LPS组与对照组相比,p-GSK-3βser9表达减少,GSK-3β表达不变,活性升高;TNF-α、IL-10及5-LO mRNA表达增多(P<0.

05)。 2.5 Celecoxib对MDA-MB-231细胞p65与DNA结合能力的影响 EMSA结果显示,在探针冷竞争反应中,正常的标记探针和NF-κB的结合条带会被100倍过量的未标记探针抑制;而在突变探针冷竞争反应中,正常的标记探针和NF-κB结合的条带不会被100倍过量的未标记突变探针抑制。结果提示,MDA-MB-231细胞中NF-κB处于组成性活化状态。 此外,与对照组相比,80μM的celecoxib作用24h后,MDA-MB-231细胞的DNA-蛋白质复合物区带明显变浅,提示celecoxib可以降低MDA-MB-231细胞中NF-κB

DNA的结合活性。 2.6 Celecoxib抑制MDA-MB-231细胞中凋亡相关分子Bcl-2的蛋白表达 Western blot分析结果显示,80μM的celecoxib能够明显抑制MDA-MB-231细胞中NF-κB下游Bcl-2分子的表达(P0.05)。 3.5过表达p65基因对MDA-MB-231细胞凋亡的影响 FCM检测结果发现,转染p65cDNA的MDA-MB-231细胞给予80μMcelecoxib共孵育48h后,细胞的凋亡率为18.53±2.51%,而空载体对照组细胞为31.21±3.29%,两者比较差异具有统计学意义(P0.05)。 3.6过表达p65基因对MDA-MB-231细胞侵袭性的影响 Transwell侵袭小室检测结果显示,转染p65cDNA的MDA-MB-231细胞培养6h后,基本没有细胞侵袭过matrigel胶,而在12h,实验组和对照组侵袭的细胞数无明显差异(P>0.05)。24h后可见转染p65cDNA的细胞克隆侵袭细胞数明显多于对照组,差异具有统计学意义(P
近年来2型糖尿病的发病呈快速增长趋势,目前估算到2030年全球糖尿病患病人数将超过3.5亿。由糖尿病引起的死亡人数仅次于心脑血管疾病、恶性肿瘤,被称为“第三杀手”,我国现有糖尿病人数目前居世界第二位。流行病学资料表明,随年龄增加2型糖尿病患病率也明显增加,是影响中老年人健康的主要疾病之一。与糖尿病相关的慢性并发症如心脑血管疾病、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变以及糖尿病神经病变是致死、致残的主要原因,严重威胁人类健康。胰岛素抵抗(insulin 点击此处 resistanse, IR)是肥胖和2型糖尿病早期和重要的发病机制,其定义为由于肝脏、脂肪和肌肉等靶组织对胰岛素生物效应的反应性降低。导致胰岛素抵抗的具体机制尚不十分清楚。骨骼肌是机体葡萄糖、脂质摄取和利用的器官,是胰岛素发挥作用的重要组织。 AG-014699研究购买 遗传因素和环境因素均可诱导IR的发生,动物和人的实验均表明无论是通过脂质灌注,还是慢性的高脂饮食,血中游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)升高均可导致胰岛素抵抗,而且不同类型脂肪酸作用不同,而饱和脂肪酸尤为重要,高脂是诱发IR的独立危险因素之一。长期高脂饮食或短期脂肪酸输入导致人或动物骨骼肌线粒体相关蛋白表达变化和功能异常。老年人、2型糖尿病患者、2型糖尿病一级亲属的骨骼肌线粒体代谢能力下降,而且胰岛素抵抗个体线粒体代谢的标志物的表达已经发生改变、出现线粒体功能下降,导致肥胖和脂质堆积,所以线粒体代谢的标志物在胰岛素抵抗和2型糖尿病发病机制中扮演重要作用。由此可见,骨骼肌线粒体功能紊乱可能是导致IR的一个重要原因,但具体机制尚不清楚。老年人易发生的IR可能与肌肉细胞内的线粒体作用减退或缺陷有关。

过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator

1α,PGC-1α),是一种核转录共激活因子,可调节线粒体生物发生、糖代谢、脂肪酸氧化、胰岛素分泌等诸多生物过程。线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2),不仅促进线粒体的融合,维持线粒体结构完整性,而且还参与线粒体的代谢调节。核呼吸因子-1(nuclear respiratory factor-1,NRF-1)是一种由核基因组编码的,对线粒体基因组表达的复制转录和翻译过程中重要的酶及蛋白因子起调控作用,对维持线粒体结构与功能发挥重要作用。PGC-1α作为转录共激活因子可以调节Mfn2的表达和NRF-1的转录。因此,骨骼肌线粒体相关因子PGC-1α、Mfn2和NRF-1的表达异常可能导致骨骼肌线粒体形态和功能的改变,其中PGC-1α在线粒体功能和胰岛素抵抗中的作用成为近年来研究的热点。 研究发现高脂引起骨骼肌线粒体相关蛋白PGC-1α,Mfn2、NRF-1表达下降,同时伴有胰岛素信号通路相关蛋白的表达异常及胰岛素抵抗,说明骨骼肌线粒体功能和胰岛素抵抗关系密切,而且PGC-1α可能在调控线粒体功能和胰岛素抵抗方面发挥重要作用。目前假说认为血中FFA升高或上述各种原因导致的线粒体功能异常均影响了脂肪酸进入线粒体的氧化过程,从而导致长链乙酰辅酶A(long-chain 一般 fatty acyl coenzyme A ,LCACoA)的堆积,甘油二酯(diacylglycerol ,DAG)生成增加,激活蛋白激酶C(protein kinase C ,PKC),进而抑制胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1 IRS-1)活性,干扰胰岛素信号传导系统,减低葡萄糖的转运,导致胰岛素抵抗的形成。PGC-1α作为重要的核转录共激活因子是否在高脂导致的线粒体功能变化、胰岛素抵抗中发挥重要作用,其机制是什么,目前国外尚无定论,国内鲜有报道。 本课题通过高脂饮食喂养老年大鼠,造成胰岛素抵抗模型,分析胰岛素抵抗状态下和罗格列酮(Rosiglitazone,RSG)干预后骨骼肌线粒体相关蛋白PGC-1α,mfn2、NRF-1的表达变化及相关关系,分析高脂饮食喂养老年大鼠线粒体功能和胰岛素敏感性的变化。采用脂肪酸孵育C2C12肌细胞,了解不同类型脂肪酸对骨骼肌PGC-1α表达的影响,寻找细胞水平研究PGC-1α作用机制的模型,并通过药物和小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)技术调节肌细胞PGC-1α的表达,分析线粒体相关蛋白和胰岛素信号通路相关蛋白的表达变化,探讨PGC-1α在高脂、线粒体功能和胰岛素抵抗中的作用机制及其上游调控因子,为研发防治胰岛素抵抗和2型糖尿病的药物提供新的作用靶点和理论依据。本实验内容主要包括以下四部分: 第一部分高脂诱导老年胰岛素抵抗大鼠骨骼肌线粒体相关蛋白的表达 目的:测定高脂饮食喂养及罗格列酮干预老年大鼠的胰岛素敏感性以及骨骼肌PGC-1α、Mfn2和NRF-1的表达变化,探讨高脂与线粒体功能、IR的关系。 方法:22-24月龄老年雄性Wistar大鼠40只随机分为2组:老年对照(OC)组16只、老年高脂(OF)组24只, 4-5月龄青年大鼠16只,为青年对照组(YC)。对照组给予基础饲料,热量组成:碳水化合物65.5%,脂肪10.3%,蛋白质24.