因此,Aurora B被视为具有很好市场潜力的抗肿瘤药物开发的一个新靶点,并受到极大的重视。目前已报道的Aurora B激酶抑制剂绝大部分处于临床前研究,少数进入临床研究的尚处于Ⅰ/Ⅱ期阶段,目前尚无有效的特异性Aurora B激酶抑制剂上市。 基于Aurora B激酶在肿瘤发生发展过程中的重要作用及目前针对激酶为靶点的抗肿瘤药物Dorsomorphin研究现状,本论文以丝／苏氨酸蛋白激酶Aurora B为分子靶点,采用Bac-to-BacTM昆虫杆状病毒表达系统表达了具有激酶活性的Aurora B激酶活性蛋白,研究了激酶活性和酶浓度、底物浓度及ATP浓度的关系,确定了酶量为0.5μl/孔、ATP浓度为20μM,底物浓度为200nM试验参数。最后使用AuGW786034浓度roraB抑制剂VX680对该模型进行了验证,表明了该模型的可行性,可用于筛选Aurora B激酶的抑制剂。 应用建立的模型,我们对182个化合物进行了筛选。筛选中发现了CGM系列5个化合物具有Aurora B激酶抑制活性,其IC50为微摩尔级,其中有两个化合物对MCF7细胞中Aurora B激酶活性具有GSK-3 信号通路一定的抑制作用。 综上所述,本研究建立了一个基于酶联免疫吸附法原理(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)的稳定灵敏的Aurora B激酶抑制剂筛选模型,并利用该模型进行了靶向蛋白激酶Aurora B的抗肿瘤药物的初步筛选,为靶向Aurora B激酶抗肿瘤药物的研制提供了筛选平台和候选化合物,将极大地推动Aurora B靶向抗肿瘤药物的开发。

其中,大部分HBV相关肝癌患者肝组织存在LHBs,LHBs转基因鼠能自发肝癌,但是LHBs在HBV相关肝癌发病过程中的作用还有待阐明。我们研究了LHBs在HBV相关肝癌发生中的作用和分子机制。肝癌细胞裸鼠移植瘤实验表明LHBs促进肿瘤形成,体外实验证实LHBs促进肝癌细胞增殖和克隆形成。通过对信号通路影响的分析提示LHBs激活PKCa/Raf1/Src/PI3K/Akt信号www.selleckchem.cn/products/Lapatinib-Ditosylate.html通路。在体外干扰Src酪氨酸激酶活性能逆转LHBs表达所诱导的促进细胞增殖、G1/S进展和凋亡抵抗。更重要的是,Src抑制剂塞卡替尼在体内、体外逆转LHBs促进细胞增殖和肿瘤形成。最后,在人肝癌肿瘤标本中验证了LHBs表达与pSrc(Y416)、pAkt (S473)、增殖标志(Ki67)正相关。结论：我们的结果提示LHBs通过活化Src/PI3K所以/Akt信号通路促进肝癌细胞肿瘤形成能力,提出了一个潜在的HBV相关肝癌发病机制,并为HBV相关肝癌的治疗提供了一个新的靶点。 本研究的第二部分,HBV-HCC高死亡率的一个原因是高转移率,但其机制还不清楚。获得失巢凋亡抵抗是肿瘤细胞侵袭转移的前提。PAK1作为一个关键的丝氨酸/苏氨酸激酶参与协调细胞骨架动态改变、病毒复制和失巢凋亡抵抗。我们假设Hhttp://www.selleckchem.cn/products/BI-2536.htmlBV感染赋予肝癌细胞PAK1依赖的失巢凋亡抵抗和转移能力。我们通过克隆形成试验和体外失巢凋亡试验研究HBV感染通过HBx赋予肝癌细胞失巢凋亡抵抗的能力。通过基于抑制Bcl2或PAK1活性,PAK1和Bcl2相互作用,转位,和PAK1调节Bcl2依赖的失巢凋亡实验来阐明HBx诱导失巢凋亡抵抗的分子机制。裸鼠皮下成瘤、体内失巢凋亡实验和基于人肝癌标本免疫组化染色的临床病理特征相关性综合分析PAK1介导的体外失巢凋亡抵抗的功能重要性。

采用CCK-8法检测细胞活力,并根据细胞活力值在OriginPro8.5.1软件中进行剂量效应曲线拟合,分别计算TM及奥沙利铂(Oxa)对各细胞株的半数抑制浓度(IC5o),据此设计自噬诱导试验的浓度。免疫印迹法检测ERS标志蛋白GRP78的表达及caspase-3蛋白的切割情况。自噬的检测与评价包括以下4个方而：a)形态学定性：采用透射电子显微镜法(TEM)观selleck抑制剂察自噬体的超微结构,以EBSS和雷帕霉素处理的细胞作为自噬诱导的阳性对照；b)细胞爬片经免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察LC3蛋白在胞浆内的定位表达情况；c)免疫印迹法检测自噬性LC3-Ⅰ蛋白向LC3-Ⅱ蛋白的转变(conversion试验)并进行定量分析；d)自噬潮(autophagic flux)分析：以氯喹(CQ)作为溶酶体和抑制剂,观察CQ存在与不存在的情况下LC3-Ⅱ蛋白表达的变化(LC3turnover试验),以全面评价自噬性降解功能。 结果：①肝癌细胞和正常细胞对ERS刺激的耐受性：在相同浓度TM刺激下,3种肝癌细胞株(HepG2、HepG2.2.15和Bel-7402)的细胞活力均高于正常肝细胞L-02的活力。②ERS诱导剂对HepG2细胞活力的影Talazoparib订单响：HepG2细胞的活力随TM作用时间的延长和剂量的增加而下降；经计算后,TM对HepG2细胞的ICso值=6.4606μg/ml;且TM处理的HepG2细胞中见caspase-3蛋白的切割现象。③HepG2细胞内ERS标志蛋白GRP78表达的变化：免疫印迹检测证实,TM刺激可以引起HepG2细胞GRP78蛋白表达的上调.GRP78蛋白表达水平与TM的浓度呈正相关,且随着TM作用时间的延长,GRP78表达水平逐渐增加。

基因沉默后生物学特性改变：流式细胞仪Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡指数。 结果 STAT3基因特异性沉默效果检测：用Western Blotting检测siRNA-STAT3-1和shRNA-STAT3-2干扰效果,具体分为5组：shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2、 shRNA-scrambled、vector和空白。在模式细胞Cilengitide株H2228中,STAT3蛋白表达下调分别为64±2.3%和52±3.7%,ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,：nTOR出现了表达下调,其磷酸化水平呈显著降低；在模式细胞H1299中,shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2分别使其STAT3表达下调65±3.1%和55±4.2%, ERK1/2, AKT,m也许TOR及对应的磷酸化蛋白无显著变化。scrambled、 vector和Fugene6三个对照组未造成STAT3表达水平在各细胞系的显著变化。 生物学特性的变化：干扰48小时后,Annexin V/PI双标记法检测发现H2228组右下象限凋亡早期细胞比例增高；H1299无显著变化。 STAT3基因过表达效果检测：用Real Time qPATM激酶抑制剂化学结构CR检测pcDNA3.1+STAT3转染H2228后的表达水平,具体分为3组：pcDNA3.1+STAT3、vector和空白。在模式细胞株H2228中,STAT3基因表达水平显著上调；应用Western Blotting检测蛋白表达发现pcDNA3.1+STAT3组蛋白表达显著升高,提示STAT3过表达模型构建成功。ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,mTOR出现了表达上调,其磷酸化水平呈显著升高。

与SMO拮抗剂环巴胺相比,GLI抑制剂GANT58和GANT61可以更有效的诱导一些癌细胞的生长停滞和凋亡,如髓细胞性白血病细胞,结肠癌细胞,横纹肌肉瘤细胞,ovine鳞状肿瘤细胞和慢性白血病细胞等。但Hh信号通路及GLI抑制剂在T-ALL中的作用尚未有研究报道。此外,最近的调查结果显示磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3这个K)/蛋白激酶B (Protein kinase B, PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶基因(Mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路持续活化是T-ALL的共同特征。人第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(Phosphatase and tensin homolog, PTEN)的基因水平或翻译后很少的失活在T-ALL中普遍存在,PTEN失活导致PI3K/AKT/mTOR通路持续活化。该信号通路在调节肿瘤细胞生长,生存和自噬等方面发挥核心作用。哌立福新(Perifosine)是一种新的烷基磷脂类似物,能够阻止AKT膜定位和磷酸化,从而抑制AKT活性。该药物在许多临床前模型显示出抗肿瘤活性,而且目前已进入多种癌症的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期临床试验,如慢性淋巴很少细胞白血病,肾细胞癌,卵巢癌,多发性骨髓瘤和结肠直肠癌等。然而,哌立福新的抗肿瘤分子机制尚未完全阐明。在本研究中,我们利用GLI和AKT抑制剂探讨Hh和AKT信号通路在T-ALL细胞中的作用,两条通路的交互作用,及不同药物联合应用的潜在细胞毒性和作用机理。第一部分GANT58抑制Hh信号诱导T-ALL细胞凋亡,并与AKT抑制剂有协同作用Hh和AKT信号通路在调节细胞增殖和存活方面起至关重要的作用,而这些通路的失调可导致肿瘤发生。

结果:本研究NSCLC患者的肿瘤组织中EGFR表达阳性率达78.67%,p-EGFR阳性率为56.00%,均明显高于癌旁肺组织;EGFR表达水平与肿瘤细胞的分化程度有关,而p-EGFR表达水平与肿瘤细胞的分化程度、淋巴结转移及临床分期均密切相关,低分化肿瘤细胞、发生肿瘤转移者的肿瘤组织、晚期肿瘤组织中的p-EGFR表达水平均明显升高。同时,p-EGFR水平与NSCLC患者临床治疗不的有效率密切相关,p-EGFR表达阴性的患者其治疗有效率明显高于阳性者。结论:EGFR的磷酸化形式在判断NSCLC疾病进展及临床疗效时可能更有实用意义,在评估NSCLC患者的临床疗效及预后判断中具有一定价值。
目的:探讨SD大鼠失舌神经对舌味蕾Shh表达的影响。方法:216只SD大鼠随机分为3组即正常组、单侧失神经组和双侧失神经组,每组各72只。腹腔注没有射麻醉后,正常组于下颌磨牙舌侧切开显露舌神经后直接缝合口底黏膜,单侧失神经组暴露并剪除右侧舌神经约0.5cm,双侧失神经组暴露并剪除双侧舌神经各0.5cm。分别于术后6h、12h、1d、2d、3d、5d、10d、15d、20d、1个月、2个月、3个月时处死动物,切取舌前2/3组织,以免疫组织化学法及原位杂交法检测味蕾Shh(sonic hedgehog)查找更多基因及蛋白的表达。结果:大鼠失舌神经支配后,舌味蕾Shh的表达逐渐降低,一侧失神经不影响健侧Shh的表达;在一定时间内,单侧失神经组可观察到术侧舌味蕾Shh表达的恢复,而双侧失神经组未见恢复。结论:SD大鼠失舌神经后,舌味蕾Shh表达明显减弱。
Aurora激酶是一类在细胞周期调控中具有重要作用的丝/苏氨酸蛋白激酶,包括三个成员:Aurora A、B、C。Aurora激酶在大多数肿瘤中均高表达,其异常调控与肿瘤的发生发展密切相关。

总体说来,悬浮芯片系统可用于对多农兽药残留实际样品的初步检测,整个检测过程仅耗时1~2h,基本上满足了多农兽药残留检测的灵敏、特异、快速和高效的需求。 扫描电镜对微球表面微观结构的表征,也直观地确证了各种靶标农兽药结合物在微球上的成功偶联、抗原抗体的配对反应和报告荧光分子链霉亲和素-藻红蛋白在微球上的结合等一系列事件。 采用传统的常规间接竞争ELISA法和LC-MS那个法检测各种农兽药残留,与悬浮芯片法进行比对研究,悬浮芯片法在检测区间、高通量和灵敏度与常规ELISA法相比有一定优势;和国标LC-MS法在灵敏度上相当,在检测区间上有一定优势。 悬浮芯片技术在国内外多应用于对大分子蛋白质和核酸的检测,对多农兽药残留的检测未见系统报道,属方法和理论上的集成创新。本研究通过建立高通量的多农兽残留检测的悬浮芯片技Fludarabine临床试验术,实现了同时对多农兽药残留的高通量多元检测分析,可初步用于对实际样品中多农兽残留的高通量测试分析,检测灵敏、特异、快速和高效,与真实值比较,误差较小,为多农兽药残留的快速检测提供了新方法,为检测平台的建立奠定了基础,具有广阔的应用和发展前景。
目的:脑恶性胶质瘤起源于神经胶质细胞,是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,约占全部脑肿瘤的50～6AUY-922核磁共振0%。胶质瘤患者症状发展快,危害严重,不易控制及治疗,是危害人类健康的重要杀手。目前,脑胶质瘤的治疗手段主要包括手术治疗、放射治疗、化学治疗和综合治疗等,尽管近年来上述治疗措施已取得长足进步,但由于胶质瘤呈浸润性生长,与周围脑组织无明显分界且易于复发,疗效均不甚理想,尤其是高度恶性的胶质瘤,在临床治疗中经常会出现对放疗的不敏感或对化疗的耐药性,导致临床治疗效果不佳,预后差。因此,胶质瘤的治疗一直是神经外科最棘手的问题之一。

2003年,美国斯坦福大学的Sorlie等~([2])将管腔(Luminal)型分为管腔A型和管腔B/C型。2008年,Liu等将HER-2过表达型细分为pure-HER2(基底细胞标志物均阴性)和basal-HER-2型(基底细
Roscovtine是人工合成的嘌呤类CDK抑制剂,已进入抗肿瘤临床研究阶段。Roscovitine的发现使得许多研究Selleckchem ABT-199团队开始关注这类结构,并在此基础上进行了大量的结构优化。已经报道的嘌呤类CDK抑制剂中,仅有6类结构以Roscovitine作为对照进行生物活性研究。其中,吡唑并[1,5-a]-1,3,5-三嗪类、吡唑并[1,5-a]嘧啶类、吡唑并[1,5-a]吡啶类和吡唑并[4,3-d]嘧啶类在生物活性方面有所提高。对这一系列CDK抑制剂不的研究进展进行综述,为新型CDK抑制剂的研究提供帮助。
目的探讨CDK6在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组化检测CDK6在鼻咽以及鼻咽癌组织中表达,并利用统计学方法分析CDK6在鼻咽与鼻咽癌中表达差异。利用统计学方法分析CDK6与鼻咽癌患者临床参数之间的相关性。结果分析了101例鼻咽癌组织和30例鼻咽组织中CDK6Compound C浓度表达。免疫组化结果显示,CDK6是一个核浆共表达因子。在鼻咽组织中,CDK6主要在胞浆表达。而在鼻咽癌组织中,主要为核浆共表达。与非癌鼻咽组织相比,CDK6蛋白在鼻咽癌组织中表达明显上调(P=0.009)。此外,CDK6调的表达与鼻咽癌组织大小(P=0.020)及临床分期(P=0.039)呈明显的正相关。CDK6表达越高,患者肿瘤越大,临床分期越晚。结论CDK6表达下调作为不利因素促进了鼻咽癌的发生发展。

2. Ad-NK4转染的RPMI8226细胞组在24、48和72小时的增殖抑制率分别为33.5%±1.21%、52.8%±1.63%和54.8%±1.77%（p<0.05）。另外，RPMI8226细胞与基质FN粘附实验显示：Ad-GFP组、Ad-NK4组、UO126作用组、RAPA作用组及AG490作用组对粘附的抑制率分别为0、46.2%、59.4%、7.7%OTX015数据表和55.8%，其中Ad-NK4组、UO126作用组和AG490作用组对粘附的抑制率均明显高于未转染组（P0.05）。2.RPMI8226细胞与ECV304粘附实验显示：Ad-NK4组、UO126作用组、RAPA作用组及AG490作用组对粘附的抑制率分别为61.9%、58.8%、20.7%和54.1%，均明显高于未转染组（P0.05）。点击此处3.与未转染组或Ad-GFP组相比较，Ad-NK4组能明显降低RPMI8226细胞MMP-2、MMP-3和VEGF蛋白的表达水平（P0.05）。另外，Ad-GFP组和未转染组之间对MMP-2、MMP-3、MMP-7和VEGF蛋白的表达水平无明显差别（P>0.05）。结论： Ad-NK4可抑制人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的粘附作用也许，Erk信号通路和JAK/STAT信号通路可能涉及。 第四部分Ad-NK4与硼替佐米联合对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的作用 研究目的:探讨Ad-NK4与硼替佐米(BOR)联合应用对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制。研究方法:1.采用MTT法检测Ad-NK4单用及与BOR联合应用对RPMI8226细胞增殖的抑制作用。2.采用PI流式细胞术检测各作用组RPMI8226细胞凋亡的影响。

结果:与对照组相比,南蛇藤提取物各浓度组明显增加E-cadherin的表达量,降低vimentin和m TOR信号通路相关蛋白的表达水平。结论:南蛇藤提取物能在一定程度上逆转人肝癌细胞EMT,其分子机制可能与m TOR信号通路相关,m TOR可作为临床治疗肝癌的新靶点。
胃肠间质瘤(GIST)的病理诊断和分子检测对临床治疗和预Everolimus价格后判断非常重要。从事GIST诊治的临床医生和病理医生均应熟悉GIST的临床病理学特点和分子检测相关内容,并了解一些容易被误诊为GIST的肿瘤类型,避免误诊和误治,使GIST病人从最大程度上获益。
肝肿瘤是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。在我国,其发病率位居所有恶性肿瘤的第四位,死亡率高居第二位。随着对ATM激酶抑制剂分子量新一代药物的深入研究,药物治疗越来越受到重视。本文综述近年针对肝癌的药物疗法和联合化疗方案及其临床研究,并对其发展进行展望。
胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)是胰岛素样生长因子家族蛋白系统主要成员之一,在人类大部分肿瘤组织中存在过度表达。其在肿瘤形成机制上具有促进肿瘤细胞生长增殖,抑制凋亡的作Pazopanib供应商用,与恶性肿瘤的发生转移有密切关联。本文就IGF-1R在肿瘤中的表达、发生、发展及以IGF-1R作为靶点诊断治疗恶性肿瘤的进展作一综述。
目的观察原头蚴在含不同浓度胰蛋白酶培养液中的存活、生长及其发育情况,为研究细粒棘球绦虫原头蚴发育提供基础资料。方法采集自然感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,在无菌条件下收集包囊内的原头蚴。将收集到的原头蚴分为6组,其中1~5组为实验组,第6组为空白对照组。